白細(xì)胞介素2基因佐劑對(duì)捻轉(zhuǎn)血矛線蟲H11核酸疫苗的免疫增強(qiáng)作用.pdf

1、捻轉(zhuǎn)血矛線蟲(Haemonchus contortus)是羊(山羊、綿羊)的主要胃腸道寄生蟲之一，常常導(dǎo)致羊特別是羔羊貧血、消瘦、甚至死亡，造成重大經(jīng)濟(jì)損失。目前的主要防治方法是使用抗蠕蟲藥，但由于蟲體抗藥性的產(chǎn)生和蔓延、藥物殘留和研制新抗蟲藥的巨額花費(fèi)，使得捻轉(zhuǎn)血矛線蟲病的免疫預(yù)防成為當(dāng)前的迫切需要。 Hll是一種隱蔽抗原，分布于成蟲階段蟲體的小腸微絨毛上皮細(xì)胞。研究資料表明Hll具有良好的免疫保護(hù)效果，天然Hll具有良好的免

2、疫保護(hù)作用，免疫動(dòng)物后，可使蟲卵減少90％，成蟲減少70％，是優(yōu)良的基因工程疫苗候選抗原，國(guó)外已在GenBank中注冊(cè)了該抗原基因的全序列，本實(shí)驗(yàn)室利用分子克隆的手段，成功構(gòu)建了捻轉(zhuǎn)血矛線蟲Hll抗原的核酸疫苗，并取得了明顯的保護(hù)效果。lL-2是T細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子之一，具有廣泛的生物學(xué)功能，不僅可以促進(jìn)T、B細(xì)胞、NK細(xì)胞、單核細(xì)胞的分裂增殖，還可促進(jìn)其它細(xì)胞因子如干擾素的分泌，增強(qiáng)抗原提呈作用，是調(diào)節(jié)機(jī)體免疫的重要因子。為了進(jìn)一步提

3、高Hll核酸疫苗的保護(hù)水平，本研究將山羊白細(xì)胞介素2(Interleukin-2)作為基因佐劑與HllDNA疫苗共同免疫動(dòng)物，以期獲得更好的免疫保護(hù)效果。本實(shí)驗(yàn)主要包括以下幾個(gè)部分： 核酸疫苗pcDNA4.0-IL-2-Hll-1，2，3的構(gòu)建和鑒定 利用DNA重組技術(shù)，將IL-2基因分別串聯(lián)于Hll基因的上游，通過(guò)酶切、序列測(cè)定等方法鑒定正確后，分別用重組質(zhì)粒免疫8-10月齡山羊，1周后取注射部位肌肉組織，用RT-PC

4、R，Western-blot方法檢測(cè)抗原的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)情況。結(jié)果顯示該Hll基因和山羊IL-2基因均能在注射部位肌肉中表達(dá)。 核酸疫苗pcDNA4.0-IL-2-Hll-1，2，3的免疫保護(hù)實(shí)驗(yàn) pcDNA4.0-IL-2-Hll-1，2，3和pcDNA4-0-Hll-1，2，3分別于0天和14天腿部肌肉免疫山羊，劑量為每一種疫苗100ug，同時(shí)設(shè)立不免疫不攻蟲(陰性對(duì)照組)和只攻蟲不免疫組(陽(yáng)性對(duì)照組)，初免后28天用5

5、，000條捻轉(zhuǎn)血矛線蟲三期幼蟲攻蟲，通過(guò)對(duì)初免后14、28、31、36、46、56、66天IgG、IgA抗體的檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)免疫組比對(duì)照組均能產(chǎn)生較高的抗體水平，說(shuō)明核酸疫苗能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生較強(qiáng)的體液免疫水平；利用流氏細(xì)胞儀測(cè)定技術(shù)，對(duì)免疫前、初免后14、28、66天各組CD4+、CD8+T細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞的檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)核酸疫苗免疫組均能誘導(dǎo)動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生較高的細(xì)胞免疫水平，尤其是pcDNA4.0-IL-2-H11-1，2，3免疫組，CD4＋、

6、CD8＋T細(xì)胞的水平在免疫后更高；另外，本實(shí)驗(yàn)還對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物外周血中各種血細(xì)胞的含量變化進(jìn)行了檢測(cè)，包括嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)，嗜堿性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)，嗜中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)，單核細(xì)胞計(jì)數(shù),淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)，血紅蛋白計(jì)數(shù)，白細(xì)胞計(jì)數(shù)。結(jié)果進(jìn)一步說(shuō)明核酸疫苗對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物具有良好的保護(hù)效果。攻蟲以后，直腸采集糞便，進(jìn)行蟲卵計(jì)數(shù)和蟲卵孵化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與陽(yáng)性對(duì)照組相比，pcDNA4.0-IL-2-H11-1，2，3免疫組蟲卵減少56.6％，pcDNA4.0-H11-1，