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文檔簡介
1、本文研究目的:擬建立人大腸癌細胞株,為大腸癌的致病機制研究、提供一個良好的細胞模型。 研究方法:本實驗分為四部分: 第一部分為腫瘤組織的體外培養(yǎng),患者男性,年齡70,取手術切除的該患者的新鮮大腸癌組織,病理確診為直腸管狀腺癌Ⅱ級,采用組織塊培養(yǎng)法與Ⅳ膠原酶消化法做細胞原代培養(yǎng)。在含10%胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)液中培養(yǎng)擴增,穩(wěn)定傳代,倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)特征和細胞生長的狀況。 第二部分對所培養(yǎng)的細胞進行鑒定
2、,包括:(1)HE染色觀察固定細胞的形態(tài),看是否具有腫瘤細胞的形態(tài)學特點。(2)透射電鏡下(TEM)觀察細胞的超微結構,從細胞內部觀察是否符合癌組織的特點。(3)免疫細胞化學鑒定細胞角蛋白來判斷細胞的組織來源,是否符合癌起源于上皮組織的特性。 第三部分對所培養(yǎng)細胞進行生物學性狀的描述。采用MTT法繪制細胞的生長曲線;流式細胞技術檢測細胞DNA指數(shù),分析研究細胞的染色體倍性;并采用boyden小室觀察細胞的轉移力。 第四部
3、分為動物實驗,BALB/C nunu裸鼠腋背部皮下接種3×10<'6>(200ul),4周后處死裸鼠,取出瘤組織做病理診斷,做HE染色觀察,觀察是否仍具有腫瘤的特點,觀察細胞的成瘤性。 研究結果: (1)大腸癌細胞在體外連續(xù)培養(yǎng)4個月,體外培養(yǎng)初步成功。 (2)細胞生長曲線表明,在原代培養(yǎng)時細胞生長較慢,傳代后細胞生長速度加快,細胞每傳一代時間為1W。 (3)倒置顯微鏡下觀察細胞呈梭形及不規(guī)則多角形,有聚
4、集生長趨勢;HE染色顯示核大藍染,符合癌細胞的形態(tài)學特征;細胞角蛋白鑒定胞漿黃染,CK陽性,證明癌細胞起源于上皮組織;透射電鏡下,見細胞核大、細胞內豐富的線粒體、表面微絨毛,細胞間連接復合體結構,符合代謝旺盛的癌細胞的特點。流式細胞DNA倍體分析結果證明細胞為異倍體細胞,也證明了腫瘤細胞的特點;boyden小室實驗表明此細胞具有轉移性。 (4)動物實驗,BALB/C nunu裸小鼠腋背部皮下接種三天后,可見接種部位產生小米粒大小
5、腫物,1W后腫物增大,隨著瘤組織的繼續(xù)增大,4W后裸小鼠精神不佳,體表溫度降低,此時測量瘤組織最終大小為2×2.5cm,瘤組織HE染色結果顯示細胞排列紊亂、失去了正常細胞所具有的接觸抑制的性質,具有癌細胞的形態(tài)學特征。 研究結論:本實驗在體外成功進行了人大腸癌組織來源的癌細胞的原代培養(yǎng)、穩(wěn)定傳代,并對其生物學性狀進行了初步描述及鑒定,初步證明了此細胞來源于上皮組織,具有癌細胞的主要形態(tài)特征,此細胞具有轉移性和成瘤性的特點,為人大
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