人大腸癌細胞建株的初步研究.pdf

1、本文研究目的：擬建立人大腸癌細胞株，為大腸癌的致病機制研究、提供一個良好的細胞模型。 研究方法：本實驗分為四部分： 第一部分為腫瘤組織的體外培養(yǎng)，患者男性，年齡70，取手術切除的該患者的新鮮大腸癌組織，病理確診為直腸管狀腺癌Ⅱ級，采用組織塊培養(yǎng)法與Ⅳ膠原酶消化法做細胞原代培養(yǎng)。在含10％胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)液中培養(yǎng)擴增，穩(wěn)定傳代，倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)特征和細胞生長的狀況。 第二部分對所培養(yǎng)的細胞進行鑒定

2、，包括：(1)HE染色觀察固定細胞的形態(tài)，看是否具有腫瘤細胞的形態(tài)學特點。(2)透射電鏡下(TEM)觀察細胞的超微結構，從細胞內部觀察是否符合癌組織的特點。(3)免疫細胞化學鑒定細胞角蛋白來判斷細胞的組織來源，是否符合癌起源于上皮組織的特性。 第三部分對所培養(yǎng)細胞進行生物學性狀的描述。采用MTT法繪制細胞的生長曲線；流式細胞技術檢測細胞DNA指數(shù)，分析研究細胞的染色體倍性；并采用boyden小室觀察細胞的轉移力。 第四部

3、分為動物實驗，BALB/C nunu裸鼠腋背部皮下接種3×10<'6>(200ul)，4周后處死裸鼠，取出瘤組織做病理診斷，做HE染色觀察，觀察是否仍具有腫瘤的特點，觀察細胞的成瘤性。 研究結果： (1)大腸癌細胞在體外連續(xù)培養(yǎng)4個月，體外培養(yǎng)初步成功。 (2)細胞生長曲線表明，在原代培養(yǎng)時細胞生長較慢，傳代后細胞生長速度加快，細胞每傳一代時間為1W。 (3)倒置顯微鏡下觀察細胞呈梭形及不規(guī)則多角形，有聚

4、集生長趨勢；HE染色顯示核大藍染，符合癌細胞的形態(tài)學特征；細胞角蛋白鑒定胞漿黃染，CK陽性，證明癌細胞起源于上皮組織；透射電鏡下，見細胞核大、細胞內豐富的線粒體、表面微絨毛，細胞間連接復合體結構，符合代謝旺盛的癌細胞的特點。流式細胞DNA倍體分析結果證明細胞為異倍體細胞，也證明了腫瘤細胞的特點；boyden小室實驗表明此細胞具有轉移性。 (4)動物實驗，BALB/C nunu裸小鼠腋背部皮下接種三天后，可見接種部位產生小米粒大小

5、腫物，1W后腫物增大，隨著瘤組織的繼續(xù)增大，4W后裸小鼠精神不佳，體表溫度降低，此時測量瘤組織最終大小為2×2.5cm，瘤組織HE染色結果顯示細胞排列紊亂、失去了正常細胞所具有的接觸抑制的性質，具有癌細胞的形態(tài)學特征。 研究結論：本實驗在體外成功進行了人大腸癌組織來源的癌細胞的原代培養(yǎng)、穩(wěn)定傳代，并對其生物學性狀進行了初步描述及鑒定，初步證明了此細胞來源于上皮組織，具有癌細胞的主要形態(tài)特征，此細胞具有轉移性和成瘤性的特點，為人大