炎癥因子Daintain-AIF-1在動脈粥樣硬化中的功能研究.pdf

1、上世紀90年代以前，認為血漿中膽固醇和低密度脂蛋白濃度過高，是動脈粥樣硬化的主要危險因素；認為動脈粥樣硬化是一種非炎性病變。近20年來的研究發(fā)現，盡管生活方式改變和新藥物的采用，可降低血漿膽固醇和低密度脂蛋白濃度，但心腦血管疾病仍然是美國、歐洲和亞洲部分地區(qū)造成死亡的主要疾病。近10年分子免疫學研究表明，動脈粥樣硬化斑塊處集中反映了一系列在細胞和分子水平上的炎癥應答，動脈粥樣硬化被鑒定為是一種炎癥性疾病。1994年，陳正望等人以豬小腸為

2、原料，從中純化并鑒定出一個多肽，命名為daintain。1996年，Utans等從大鼠心臟移植排斥反應所形成的動脈粥樣硬化斑塊組織中克隆出一個巨噬細胞因子allograft inflammatory factor-1 (AIF-1)，由于二者的一級結構高度同源，故并稱Daintain/AIF-1。作為一個由巨噬細胞分泌，與炎癥、免疫相關的炎癥因子，對Daintain/AIF-1在炎癥、血管病變、腫瘤以及自身免疫性疾病等方面的影響有著越來

3、越多的研究。本實驗室前期研究表明，Daintain/AIF-1 能夠促進腫瘤增生、改變細胞周期、促進細胞增殖以及加劇1 型糖尿病，由于這些都與炎癥和免疫方面密切相關。此外，我們還發(fā)現Daintain/AIF-1在動脈粥樣硬化組織中表達陽性，而在周圍正常組織和正常人動脈血管組織中為弱陽性或陰性。這提示Daintain/AIF-1與動脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展過程密切相關。然而，目前Daintain/AIF-1 影響動脈粥樣硬化進程的機理并不清

4、楚。研究發(fā)現Daintain/AIF-1 可以促進巨噬細胞、血管平滑肌細胞和動脈內皮細胞的增殖、遷移以及增強T 淋巴細胞的分泌活動，表明它在巨噬細胞、血管平滑肌細胞和動脈內皮細胞等動脈粥樣硬化組織中存在的細胞激活過程中發(fā)揮重要的作用?，F在已經清楚，巨噬細胞向泡沫細胞的轉化、動脈內皮損傷以及血管平滑肌增生在動脈粥樣硬化的起始、發(fā)展直到斑塊破裂過程中扮演重要角色。由此可預見，Daintain/AIF-1 可能通過激活巨噬細胞、血管平滑肌細胞

5、和動脈內皮細胞來作用于動脈粥樣硬化的進程。
　　 本研究主要內容包括：⑴通過免疫組織化學染色的方法，檢測發(fā)現在動脈粥樣硬化斑塊處有大量的Daintain/AIF-1 陽性區(qū)，而其周圍的非病變區(qū)域中幾乎不能檢測到Daintain/AIF-1。⑵為進一步研究Daintain/AIF-1和動脈粥樣硬化之間的關系，我們檢測了病人血清中Daintain/AIF-1的含量。我們采用具有潛在動脈粥樣硬化傾向的高血壓病人血清來檢測Daintai

6、n/AIF-1的含量，并發(fā)現與正常人相比，該類病人血清中其Daintain/AIF-1的含量較高，且與LDL-C的含量成正比關系，為Daintain/AIF-1 研發(fā)成為一種新的動脈粥樣硬化檢測指標奠定了一定的基礎。⑶為了更經濟、方便地獲得Daintain/AIF-1 蛋白，我們采用基因工程方式，表達出了高純度的Daintain/AIF-1。并基于其已經報道的部分活性做了檢測，證明重組蛋白具有生物學功能活性。⑷尋找Daintain/AI

7、F-1在小鼠胰腺和血管組織中的相互作用蛋白。此前，本實驗室發(fā)現在體外Daintain/AIF-1 能夠與胱硫醚β合成酶相結合，通過原核表達的方法來獲得胱硫醚β合成酶，用以研究Daintain/AIF-1 對其酶活的影響；通過將重組的Daintain/AIF-1 偶聯在NTA-Ni 介質上，與動脈血管組織裂解液結合洗脫后，發(fā)現一個新的結合蛋白——血紅蛋白β1 亞基，后續(xù)研究發(fā)現Daintain/AIF-1 能夠促使紅細胞溶解和血紅素的釋放

8、。⑸在體內，我們通過給小鼠尾靜脈注射Daintain/AIF-1，研究其對小鼠體內與動脈粥樣硬化相關的多項生化指標的影響。結果發(fā)現Daintain/AIF-1 能使小鼠血清中的C 反應蛋白、同型半胱氨酸、血糖濃度上升，降低超氧化物歧化酶的活性。⑹在體外，我們通過在培養(yǎng)基中添加Daintain/AIF-1的方式，探究Daintain/AIF-1對U937和HUVEC的功能特征的影響。結果顯示，添加Daintain/AIF-1的實驗組的增殖

9、速率明顯快于對照組。此外，我們還發(fā)現Daintain/AIF-1 能夠促進內皮細胞中的C-反應蛋白和一氧化氮合酶的基因表達。佛波醇-12-肉豆蔻酯-13-乙酯（PMA）趨化的U937 巨噬細胞與ox-LDL 共培養(yǎng)實驗中發(fā)現，Daintain/AIF-1 能夠通過提高巨噬細胞表面的清道夫受體的表達，而增強巨噬細胞吞噬ox-LDL 能力，從而促進巨噬細胞向泡沫細胞轉化。綜上所述，Daintain/AIF-1在動脈粥樣硬化形成和中后期的發(fā)展