大鼠肝臟及小鼠大腦皮質質膜蛋白質組學研究.pdf

1、細胞質膜介導細胞與外界環(huán)境以及細胞與細胞之間的物質交換、能量轉換和信號傳遞。細胞質膜微區(qū)是細胞質膜中富含鞘脂和膽固醇的膜微疇結構，參與細胞內外物質交流、細胞信號傳導等重要的細胞生命活動。質膜蛋白質在藥物研究中有重大意義。 本論文研究分為兩個部分，第一部分為大鼠肝臟低豐度整合質膜蛋白質組學研究。肝臟是人體中最重要的器官之一，在代謝中扮演著重要的角色，因此肝臟質膜蛋白質組的研究具有重要意義。低豐度、強疏水性膜蛋白質的鑒定仍然是質膜蛋

2、白質組研究的主要挑戰(zhàn)，這部分工作采用兩次密度梯度離心法純化大鼠肝臟質膜，電鏡和免疫印跡顯示，與一次超離相比，質膜富集了6倍。收集質膜采用Na<,2>CO<,3>處理，氯仿與甲醇抽提，以及Triton X-100處理后進行超離以分離出微區(qū)的三個組分。共鑒定了457個非冗余蛋白質，46％來自微區(qū)提取策略，23％具有一個或一個以上的跨膜區(qū)(TM)，53個蛋白質與細胞通信有關。研究結果表明：Na<,2>CO<,3>處理膜有利于堿性蛋白質研究，氯

3、仿與甲醇的使用有利于多跨膜區(qū)蛋白質研究，微區(qū)提取策略有利于低豐度蛋白質研究。 第二部分為衰老過程中小鼠大腦皮質質膜微區(qū)的比較蛋白質組學初步分析。大腦皮質是中樞神經系統(tǒng)最復雜的部位，是人類的最高神經中樞。大腦皮質細胞進行著頻繁的信號傳導和物質交換過程，其細胞質膜微區(qū)在這些活動中起到了重要作用。衰老是生命的基本過程，腦功能退化是衰老的重要方面，因此，衰老過程中大腦皮質質膜微區(qū)的比較蛋白質組學研究具有重要意義。本部分工作對D-半乳糖亞

4、急性衰老模型小鼠和正常小鼠的大腦皮質質膜微區(qū)蛋白質進行了比較蛋白質組學初步分析。采用去垢劑處理和蔗糖密度梯度離心方法得到純化的質膜微區(qū)蛋白質，經免疫印跡檢驗顯示微區(qū)蛋白得到了富集且降低了其他細胞器的污染。采用雙向電泳和軟件分析得到了造模組和對照組微區(qū)蛋白質組的78個差異蛋白質點，經質譜鑒定了36個蛋白質，其中19個蛋白質在造模組中是上調的，17個是下調的。在上調的差異蛋白質中，多為糖代謝和生物氧化作用過程中起重要作用的酶及應激蛋白質，在