Hes1-Hes5基因?qū)m頸癌細(xì)胞分化的調(diào)節(jié)作用及其信號(hào)途徑的研究.pdf

1、研究背景宮頸癌是女性常見(jiàn)的惡性腫瘤,次于乳腺癌,且近年來(lái)有上升趨勢(shì);死亡率居女性癌癥死亡的第二位,是當(dāng)今嚴(yán)重威脅婦女健康的主要疾病之一.宮頸癌發(fā)病的首要因素是高危型HPV(HR-HPV)感染,HR-HPV DNA通過(guò)表達(dá)病毒致癌蛋白E6、E7,引起宿主細(xì)胞的異常增殖和永生化,最終導(dǎo)致宮頸癌發(fā)生.但在正常細(xì)胞向腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)化過(guò)程中,僅有細(xì)胞的異常增殖是不夠的,細(xì)胞去分化也是癌變過(guò)程的關(guān)鍵步驟;因此越來(lái)越多的研究者將關(guān)注點(diǎn)集中在腫瘤發(fā)生過(guò)程

2、中細(xì)胞分化程度的改變.宮頸癌的發(fā)生是一個(gè)比較緩慢的過(guò)程,整個(gè)轉(zhuǎn)化過(guò)程常需要數(shù)年至數(shù)十年之久;這使得宮頸癌的早期診斷早期治療成為可能.對(duì)于早期宮頸癌患者,尤其是年輕患者應(yīng)以手術(shù)治療作為主要的治療方法.手術(shù)治療可以發(fā)現(xiàn)確切影響預(yù)后的臨床病理因素,從而使得輔助治療更加有的放矢.在眾多的預(yù)后影響因素中,腫瘤細(xì)胞分化是最本質(zhì)的因素.因此,揭示在宮頸癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中引起腫瘤細(xì)胞分化改變的分子機(jī)制對(duì)宮頸癌防治有重要意義. 本研究首先檢測(cè)正常

3、宮頸上皮、宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN) 以及宮頸鱗狀細(xì)胞癌(SCC)細(xì)胞中分化相關(guān)蛋白 Hesl、Hes5的表達(dá)情況,并分析其與早期宮頸癌預(yù)后相關(guān)因素的關(guān)系,以探討 Hesl/Hes5蛋白的表達(dá)在宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展的作用;然后應(yīng)用RNA干擾技術(shù)分別沉默宮頸鱗癌細(xì)胞株 (Sila 細(xì)胞)中的 Hes-1及Hes-5基因,觀察干擾后SiHa細(xì)胞中 Hes-1/Hes-5的表達(dá)及其上、下游蛋白及與細(xì)胞分化、增殖相關(guān)指標(biāo)的改變,并探討 Hesl/H

4、es5以及Notch-Hes信號(hào)途徑與宮頸癌細(xì)胞分化、增殖的關(guān)系;旨在闡明 Hes-1/Hes-5基因及其信號(hào)途徑在宮頸癌細(xì)胞分化中的調(diào)節(jié)作用,并尋找能阻斷抑制宿主細(xì)胞分化的關(guān)鍵分了,為探索宮頸癌防治新策略和新靶點(diǎn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù). 第一部分:Hes1/Hes5蛋白在宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸癌組織中的表達(dá)研究 目的:分別檢測(cè)正常宮頸上皮、宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸鱗狀細(xì)胞癌中分化相關(guān)蛋白Hes1及Hes5的表達(dá)水平,初步探討Hes1/

5、Hes5蛋白的表達(dá)與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后的關(guān)系. 材料和方法:選取2004年10月至2005年6月在浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院病理科存檔的宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸鱗狀細(xì)胞癌絹.織,包括輕度宮頸上皮內(nèi)瘤變(CINI)31例,中一重度宮頸上皮內(nèi)瘤變(CINⅡ-Ⅲ)77例,宮頸鱗狀細(xì)胞癌(SCC)109例,其中高分化26例,中分化50例及低分化33例.所有病人取標(biāo)本前均未接受過(guò)放、化療及免疫治療.在109例SCC病人中,73例早期宮

6、頸癌(包括la期10例,Ⅰb期59例,Ⅱa期4例)接受了手術(shù)治療,具有完整的臨床病理資料,包括(1)病人年齡, (2)臨床分期, (3)腫瘤細(xì)胞分化, (4)腫瘤大小, (5)間質(zhì)浸潤(rùn)深度,(6)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及(7)宮旁淋巴血管侵犯情況等.選擇同期在浙江人學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院病理科存檔的因子寓肌瘤進(jìn)行全子宮切除、經(jīng)病理確診無(wú)宮頸病變的78例正常宮頸鱗狀上皮組織作為正常對(duì)照.通過(guò)免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)Hes1、Hes5蛋白的表達(dá)情況.

7、 結(jié)論 1.Hes1/Hes5蛋白過(guò)表達(dá)可能參與宮頸鱗狀上皮的癌變過(guò)程; 2.Hes1/Hes5蛋白的過(guò)表達(dá)有望成為預(yù)測(cè)早期宮頸癌不良預(yù)后因素的標(biāo)志. 第二部分: Hes1/Hes5基因?qū)m頸癌細(xì)胞分化、增殖的調(diào)節(jié)作用 研究目的:探討宮頸癌細(xì)胞中Hes1/Hes5基因及Notch-Hes途徑對(duì)宮頸癌細(xì)胞分化、增殖的影響,從而明確分化相關(guān)基因Hes1/Hes5對(duì)宮頸癌細(xì)胞分化、增殖的調(diào)節(jié)作用.

8、 材料和方法:通過(guò)RNA干擾(RNAi)技術(shù)分別沉默SiHa細(xì)胞中Hes1/Hes5基因,免疫細(xì)胞化學(xué)、免疫印跡檢測(cè)干擾后SiHa細(xì)胞Hes1/Hes5上下游蛋白以及分化、增殖相關(guān)蛋白的改變;MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖力的改變. 結(jié)論: 1.通過(guò)RNA干擾能成功沉默宮頸癌細(xì)胞中的Hes1/Hes5基因; 2.Hes1/Hes5基因抑制宮頸癌細(xì)胞分化,Hash1蛋白參與了這一抑制過(guò)程的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo); 3.下調(diào)Hes