納米羥基磷灰石復合骨髓基質細胞修復骨缺損的實驗研究.pdf

1、眾所周知，羥基磷灰石具有良好的生物相容性和骨傳導能力；在臨床上用于骨缺損的修復已有幾十年的歷史。但由于普通羥基磷灰石具有脆性大、韌性差、不易塑形等缺點，只能用于非負重部位的骨缺損充填修復，因而大大限制了其在臨床上的廣泛應用。而納米羥基磷灰石(Nano-Hydroxyapitite，Nano-HA)除了有普通HA材料的優(yōu)越性外，還有以下優(yōu)點：①Nano-HA微結構類似于天然骨基質，可以被骨組織直接利用；②與天然骨內無機礦物有相近的尺寸，更

2、有助于人體細胞和大分子對其的識別，從而可提高材料的生物活性、利用度和生物相容性；⑨釋放的鈣、磷等離子可能有更多的成分參與骨代謝，更好地促進骨形成；④有研究表明，Nano-HA低結晶度和含碳酸根特征，具有與骨鍵合的能力，用這種材料制成的骨植體表面可提供適宜的環(huán)境促進膠原和礦物的沉積以及成骨細胞的黏附。本實驗通過體內及體外實驗，探討骨髓基質細胞與納米羥基磷灰石結合修復骨缺損的可能機制。并為其進一步的研究開發(fā)及臨床應用研究提供參考資料。

3、 目的： 體外定向誘導培養(yǎng)及鑒定骨髓基質細胞(bone marrow stromal cells，BMSCs)，并檢測納米羥基磷灰石對其生長增殖的影響，通過動物實驗測定不同比值，探討骨髓基質細胞與納米羥基磷灰石結合修復骨缺損的可能機制。 方法： 體外獲取骨髓基質細胞后定向誘導，取第3代細胞對其進行鑒定用于實驗研究。制備不同濃度的Nano-HA浸提液用于培養(yǎng)細胞，用MTT法檢測并計算細胞增殖率。成年雄性新西蘭白兔

4、12只(由安徽醫(yī)科大學動物實驗中心提供)，體重2.0～2.3kg。隨機分成2組：A、B組，A、B組兔均取左右兩股骨去骨，造成1 cm×0.5cm的骨缺損。右側為實驗側，放置BMSCs-Nano-HA復合物；左側為不加BMSCs的對照組。術后6、12周各時相點行攝X線，然后取材行大體觀察，并制作組織學切片進行組織學觀察、OCN染色及力學檢測。對各觀察期各組材料/受體骨界面新骨形成及骨缺損修復情況、材料與受體骨愈合情況及骨缺損修復后的力學強

5、度進行評價。對上述實驗所得數據用SPSS11.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析比較，并規(guī)定以P<0.05為具有顯著性差異。結果： 1、骨髓基質細胞傳代后細胞增殖進一步加快，傳至第3代，培養(yǎng)2 d即可見細胞單層融合。茜素紅染色可見鈣結節(jié)出現，Ⅰ型膠原免疫組化染色為陽性結果。 2、納米羥基磷灰石對成骨細胞增殖無影響，細胞毒性評級為0～1級。 3、組織學、OCN染色和影像學檢查結果顯示，骨修復速度及質量：實驗組優(yōu)于對照組；力學