枳轉(zhuǎn)錄因子PtrERF36在枳中的抗寒功能研究.pdf

1、枳(Poncirus trifoliata(L.) Raf.）是重要的柑橘砧木，具有較強(qiáng)的抗寒性，故常作為抗寒研究的重要材料。AP2/ERF是植物系統(tǒng)特有的一類轉(zhuǎn)錄因子大家族，越來越多的研究表明該家族的一些成員參與了植物生長發(fā)育、病菌防御以及非生物脅迫在內(nèi)的多種生物學(xué)過程，但大部分成員的功能卻并不清晰。本文以實(shí)驗(yàn)室克隆的PtrERF36基因?yàn)檠芯繉?duì)象，旨在揭示該基因在枳抗寒中的功能和初步抗寒機(jī)制，主要研究結(jié)果如下:
　　1、構(gòu)建P

2、tr ERF36-RN Ai載體，通過根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化，獲得了202棵枳再生植株，PCR鑒定出29株陽性轉(zhuǎn)基因株系，陽性轉(zhuǎn)化率為14.36％，對(duì)6個(gè)PtrERF36干涉株系的表達(dá)量進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)干涉株系的表達(dá)量不同程度地低于野生型，其中＃47、＃56株系抑制程度最為明顯。
　　2、對(duì)野生型和干涉株系＃47、＃56進(jìn)行抗寒性分析，結(jié)果表明0℃處理12h后，干涉系植株受到更為嚴(yán)重的傷害，電導(dǎo)率、MDA及活性氧（H2O2和O2-）含

3、量均高于野生型。POD、SOD酶活性低于野生型。上述結(jié)果表明PtrERF36被抑制后使枳的抗寒性減弱，推測PtrERF36可能在枳的抗寒性中起著正調(diào)控的作用。
　　3、qRT-PCR分析枳PtrERF36-RNAi系中脅迫相關(guān)基因的表達(dá)量，發(fā)現(xiàn)正常生長條件下，干涉系中POD、CAT、SOD、COR15以及ICE1等基因的表達(dá)水平均低于野生型。低溫處理后上述基因表達(dá)量有所增加，但干涉系仍低于野生型。其中POD下調(diào)最為明顯，分析POD