CREBZF-Zhangfei在小鼠卵巢顆粒細(xì)胞凋亡調(diào)控中的作用.pdf

1、哺乳動物的卵泡發(fā)育是一個復(fù)雜的動態(tài)變化的過程，在一個發(fā)情周期中，卵泡發(fā)育成熟排卵，之后形成黃體的過程是在多種激素、生長因子和細(xì)胞因子作用下完成的，卵泡發(fā)育過程中，多數(shù)卵泡會由于優(yōu)勢選擇而閉鎖，只有少量的卵泡發(fā)育成熟直到排卵，而卵泡的閉鎖過程實際上就是卵泡內(nèi)顆粒細(xì)胞的凋亡過程。研究表明，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(ERstress)相關(guān)分子伴侶參與調(diào)節(jié)卵泡的發(fā)育過程并起到重要的作用，然而其具體的作用機(jī)制仍不明確。
　　CREBZF/Zhangfei

2、(SMILE-L/SMILE-S)是在研究宿主細(xì)胞因子HCF-1時發(fā)現(xiàn)的一種堿性亮氨酸拉鏈(basic region leucinezipper, bZIP)轉(zhuǎn)錄因子，早先的研究發(fā)現(xiàn)CREBZF在哺乳動物體多數(shù)組織中均有表達(dá)，并參與調(diào)節(jié)生理、病理過程。研究表明CREBZF/Zhangfei能夠與多種內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白相互作用，對調(diào)控內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激起到重要作用。本研究利用免疫組化、干擾慢病毒技術(shù)、RT-PCR、Western Blot、流式細(xì)

3、胞術(shù)等方法對CREBZF/Zhangfei在不同發(fā)育時期的小鼠卵巢中的表達(dá)定位和表達(dá)規(guī)律進(jìn)行檢測，并深入研究了CREBZF/Zhangfei對小鼠卵泡顆粒細(xì)胞凋亡的影響，得到以下結(jié)果:
　　(1) CREBZF/Zhangfei定位于小鼠卵巢卵泡中，在不同發(fā)情時期的小鼠卵巢中，CREBZF/Zhangfei在發(fā)情前期和發(fā)情期的表達(dá)量高，而在發(fā)情間期和發(fā)情末期的表達(dá)量低。另外，在促性腺激素處理不同時間的未性成熟雌性小鼠的卵巢中，CR

4、EBZF/Zhangfei也存在一定的表達(dá)規(guī)律。
　　(2)通過慢病毒包裝技術(shù)，得到針對CREBZF/Zhangfei基因的過表達(dá)和干擾慢病毒，能夠成功轉(zhuǎn)導(dǎo)顆粒細(xì)胞并穩(wěn)定表達(dá)，顯著提高或抑制CREBZF/Zhangfei的蛋白翻譯水平，干擾效率在70％以上。
　　(3)利用人工誘導(dǎo)和抑制CREBZF/Zhangfei表達(dá)的原代小鼠卵泡顆粒細(xì)胞模型進(jìn)一步檢測細(xì)胞凋亡情況和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白、MAPK信號途徑蛋白、線粒體途徑凋亡

5、相關(guān)蛋白發(fā)現(xiàn)，誘導(dǎo)CREBZF/Zhangfei能夠促進(jìn)CHOP、GRP78、BAX、actived-Caspase-3的表達(dá)并抑制ERK的磷酸化和BCL-2的表達(dá)從而誘導(dǎo)顆粒細(xì)胞凋亡，反之抑制CREBZF/Zhangfei能夠促進(jìn)ERK的磷酸化和BCL-2的表達(dá)并抑制CHOP、GRP78、BAX和actived-Caspase-3的表達(dá)從而抑制凋亡。
　　綜上，本次研究通過體內(nèi)外試驗檢測CREBZF/Zhangfei對卵泡發(fā)育的