白細(xì)胞介素-13基因多態(tài)性與慢性牙周炎的相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景:
　　 牙周炎是一種慢性、非特異性感染性疾病，是口腔兩大類疾病之一，在世界范圍內(nèi)均有較高患病率。慢性牙周炎是最常見的一類牙周炎，約占牙周炎患者的95％，由長(zhǎng)期存在的慢性牙齦炎向深部牙周組織擴(kuò)展而引起，主要臨床特征有牙齦炎癥、牙周袋形成、臨床附著喪失、牙槽骨吸收，嚴(yán)重者可出現(xiàn)牙齒松動(dòng)、移位，最后導(dǎo)致牙齒缺失。盡管牙菌斑生物膜的細(xì)菌及其產(chǎn)物是引發(fā)牙周炎的始動(dòng)因子，但不是唯一的因素。
　　 越來(lái)越多的證據(jù)表明，某些特

2、定染色體的基因多態(tài)性影響牙周炎的發(fā)生，并決定疾病的進(jìn)展速度和嚴(yán)重程度。近年來(lái)，白細(xì)胞介素-1(Interleukin-1，IL-1)、白細(xì)胞介素-6(Interleukin-6，IL-6)、腫瘤壞死因子-α(tumornecrosisfactor-α，TNF-α)、IgG2Fc段受體基因和維生素D受體(vitaminDreceptor，VDR)等細(xì)胞因子與牙周炎的相關(guān)性已先后有人研究報(bào)道過(guò)，并得出了有意義的結(jié)論。然而，白細(xì)胞介素-13基

3、因多態(tài)性與牙周炎的相關(guān)性國(guó)內(nèi)外研究報(bào)道得很少。
　　 在牙周炎致病過(guò)程中，Ⅱ型輔助性T細(xì)胞(type2helperTlymphocyte，Th2)細(xì)胞會(huì)分泌包含白細(xì)胞介素-4(Interleukin-4，IL-4)、白細(xì)胞介素-13(Interleukin-13，IL-13)等細(xì)胞因子，有利于B細(xì)胞調(diào)節(jié)的體液免疫與改善炎癥癥狀。IL-13能抑制血液中的單核細(xì)胞分泌腫瘤壞死因子-α(TNF-α)，達(dá)到部分抗炎效果。并可激活轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)

4、因子β1（transforminggrowthfactor-β1，TGF-β1)而產(chǎn)生纖維化作用。IL-13可通過(guò)影響骨保護(hù)因子系統(tǒng)等，進(jìn)而抑制骨吸收。IL-13和IL-4的氨基酸序列有30％的同源性，而且IL-4和IL-13分別通過(guò)白細(xì)胞介素4受體(Interleukin-4receptor,IL-4R)或白細(xì)胞介素13受體(Interleukin-13receptor，IL-13R)起作用，兩種受體共用IL-4Rα鏈，因而，IL-1

5、3與IL-4的生物學(xué)作用有部分重疊，是人體內(nèi)僅有的可以直接促進(jìn)IgE合成的細(xì)胞因子。研究發(fā)現(xiàn)慢性牙周炎個(gè)體的牙齦組織中IgE明顯增加，牙周病損區(qū)IL-13和IL-4能刺激B細(xì)胞產(chǎn)生IgE和IgG來(lái)對(duì)抗牙周致病菌的脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)。最近國(guó)外已有研究證實(shí)IL-4啟動(dòng)子區(qū)單核苷酸多態(tài)性（singlenucleotidepolymorphism，SNP）和內(nèi)含子2基因70bp重復(fù)序列多態(tài)性與高加索人侵襲性牙

6、周炎的易感性有關(guān)。國(guó)內(nèi)也有研究發(fā)現(xiàn)IL-4啟動(dòng)子-590位點(diǎn)的SNP對(duì)我國(guó)漢族人CP易感性有影響，是漢族人CP遺傳危險(xiǎn)因素之一。聯(lián)系到IL-13和IL-4有相似的生物學(xué)作用，部分研究表明IL-4與牙周炎有關(guān)聯(lián)，且近年來(lái)一些研究發(fā)現(xiàn)IL-13的基因遺傳性變異與哮喘、多發(fā)性硬化癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎都有關(guān)聯(lián)，所以我們初步假定IL-13基因-1112位點(diǎn)和+1923位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性可能在慢性牙周炎的進(jìn)程中起某些作用。
　　 研究目的:<

7、br>　　 本研究的目的是研究一個(gè)中國(guó)漢族人群中白細(xì)胞介素-13基因啟動(dòng)子區(qū)-1112C/T和內(nèi)含子區(qū)+1923C/T位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性與慢性牙周炎易感性的關(guān)系。
　　 研究方法:
　　 所有受試者隨機(jī)選自2008年9月～2010年5月廣東省口腔醫(yī)院門診患者。每位受試者符合以下條件:40歲及以上年齡，至少有14顆可評(píng)估的牙（至少有4顆磨牙），中國(guó)漢族和沒有親緣關(guān)系的個(gè)體，無(wú)系統(tǒng)性疾病，無(wú)正畸治療史，3個(gè)月內(nèi)未服用過(guò)抗生

8、素，一年內(nèi)未接受過(guò)牙周治療，婦女無(wú)妊娠及哺乳。
　　 所有受試者分為兩組:慢性牙周炎組共110例，健康對(duì)照組106例，慢性牙周炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)采用1999年牙周病分類國(guó)際研討會(huì)所推薦的診斷標(biāo)準(zhǔn)。所有受試者均檢查六顆指數(shù)牙:11、16、26、31、36、46，如果指數(shù)牙缺失則以鄰牙代替，每顆牙記錄6個(gè)位點(diǎn)，牙周檢查的內(nèi)容包括牙周袋探診深度(probingpocketdepth，PD)、臨床附著喪失(clinicalattachment

9、loss，CAL)及探診出血(bleedonprobing，BOP)，并紀(jì)錄除第三磨牙外所有缺失牙。健康對(duì)照組則要求沒有牙齦炎、牙周炎的臨床表現(xiàn)，包括沒有臨床附著喪失和探診出血位點(diǎn)，牙周探診深度≤3mm。所有受試者紀(jì)錄姓名、性別、年齡、民族、身高、體重、全身狀況、牙周炎病史及家族史等，取頰粘膜脫落細(xì)胞棉拭子，一名調(diào)查者對(duì)受試者作牙周檢查，另一名調(diào)查者紀(jì)錄，為了保證檢查的準(zhǔn)確性和一致性，本研究的檢查均由經(jīng)過(guò)培訓(xùn)和校正的同一人員完成。

10、>　　 采用CHELEX—100法提取基因組DNA，分光光度計(jì)檢測(cè)DNA濃度，采用多聚酶鏈反應(yīng)—限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(polymerasechainreaction-restrictionfragmentlengthpolymorphisms，PCR-RFLP)法測(cè)定IL-13啟動(dòng)子區(qū)-1112位點(diǎn)和內(nèi)含子區(qū)+1923位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性的基因型，引物按參考文獻(xiàn)設(shè)計(jì)。
　　 在本研究中我們隨機(jī)抽取了約20％以上的樣本直接測(cè)序，以

11、驗(yàn)證多聚酶鏈反應(yīng)—限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR-RFLP)法的正確性。
　　 每個(gè)位點(diǎn)中通過(guò)卡方檢驗(yàn)來(lái)檢驗(yàn)基因型的哈-溫平衡(Hardy-Weinbergequilibrium).計(jì)量資料（包括年齡、體重指數(shù)、失牙數(shù)）描述時(shí)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±S)，年齡、體重指數(shù)(bodymassindex，BMI)的P值通過(guò)t檢驗(yàn)來(lái)計(jì)算，兩組間失牙數(shù)的比較通過(guò)Mann-Whitney檢驗(yàn)來(lái)計(jì)算?？ǚ綑z驗(yàn)用來(lái)檢驗(yàn)分類變量（包括性別、吸煙、壓

12、力、等位基因頻率、基因型分布）的差異的顯著性。多因素分析采用二分類logistic回歸分析。P＜0.05為有顯著性差異。本研究統(tǒng)計(jì)通過(guò)SPSS16.0軟件完成。
　　 研究結(jié)果:
　　 比較110例慢性牙周炎患者和106例健康個(gè)體的基礎(chǔ)資料，其中吸煙和失牙數(shù)有差異，P＜0.05。
　　 IL-13-1112和+1923的基因型都符合哈—溫平衡。IL-13-1112位點(diǎn)基因型CC、CT、TT的分布，在慢性牙周炎組分

13、別為73.6％、21.8％、4.6％;在健康對(duì)照組分別為66.0％、30.2％、3.8％，兩組間基因型頻率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(x2=2.015，P＞0.05）。C、T等位基因頻率在慢性牙周炎組分別為84.5％、15.5％，在健康對(duì)照組分別為81.1％、18.9％，兩組間等位基因頻率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(x2=0.886，P＞0.05)。IL-13+1923位點(diǎn)基因型CC、CT、TT的分布，在慢性牙周炎組分別為9.1％、37.3％、53.6％，在健康對(duì)

14、照組分別為11.3％、31.1％、57.6％，兩組間基因型頻率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（x2=1.006，P＞0.05）。C、T等位基因頻率在慢性牙周炎組分別為27.7％、72.3％，在健康對(duì)照組分別為26.9％、73.1％，兩組間等位基因頻率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（x2=0.038，P＞0.05）。
　　 因?yàn)閮山M樣本在基線對(duì)比時(shí)我們發(fā)現(xiàn)吸煙和失牙數(shù)兩個(gè)變量在兩組間有差異（P=0.049，P=0.000），在調(diào)整了吸煙和失牙數(shù)的多因素logisti

15、c回歸分析后，結(jié)果顯示IL-13-1112位點(diǎn)基因多態(tài)性（β=-0.250，W=0.890，P＞0.05）和1L-13+1923位點(diǎn)基因多態(tài)性（β=0.020，W=0.009，P＞0.05）均不是慢性牙周炎的影響因素。而失牙數(shù)（β=0.328，W=12.237，P=0.000）是慢性牙周炎的危險(xiǎn)因素。
　　 研究結(jié)論:
　　 1、IL-13基因啟動(dòng)子區(qū)-1112位點(diǎn)多態(tài)性與中國(guó)漢族人的牙周炎易感性無(wú)明顯相關(guān)性。