清開靈有效組分及配伍抗神經(jīng)元缺血再灌注損傷的鈣相關(guān)機制研究.pdf

1、北京中醫(yī)藥大學碩士學位論文清開靈有效組分及配伍抗神經(jīng)元缺血再灌注損傷的鈣相關(guān)機制研究姓名：張金鈴申請學位級別：碩士專業(yè)：中西醫(yī)結(jié)合基礎(chǔ)指導教師：李澎濤20070601摘要中文摘要腦缺血后由于再通帶來的繼發(fā)性再灌注損傷，對缺血性中風的預(yù)后和治療有重要的影響。腦缺血的病理生理是個多環(huán)節(jié)、多因素、多途徑損傷的酶促級聯(lián)反應(yīng)，西醫(yī)干預(yù)其中某一途徑的治療，臨床療效甚微。而中醫(yī)學可從整體觀念以及中藥的復方特 點出發(fā)，利用其可作用于多環(huán)節(jié)多靶點，來干預(yù)

2、腦缺血損傷的病理過程。近年來研究表明，神經(jīng)細胞內(nèi)鈣超載是諸多原因造成細胞損傷和死亡的共同途徑；清開靈有效組分梔子苷、黃芩苷、膽酸、珍珠母等具用解毒通絡(luò)、開竅醒神等功效。故本實驗以缺血再灌注過程中游離鈣離子變化及相關(guān)機制的研究為切入點，觀察中藥單體梔子苷、黃芩苷、膽酸、珍珠母及配伍抗缺血再灌注損傷的機制。論文主要分為文獻綜述和實驗研究兩個部分，文獻綜述包括：缺血再灌注神經(jīng)元損傷與鈣相關(guān)調(diào)節(jié)機制以及清開靈有效組分梔子苷、黃芩苷、膽酸、珍珠母

3、治療腦缺血再灌注損傷的研究概況。實驗部分如下： 1 ．研究方法，實驗研究選用新生2 4 小時內(nèi)S P F 級別的S D 大鼠，分離海馬組織培養(yǎng)海馬神經(jīng)元。采用鈣離子、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的特異性熒光分子探針及激光共聚焦顯微鏡檢測分析技術(shù)，觀察了清開靈有效組分梔子苷、黃芩苷、膽酸、珍珠母及配伍對海馬神經(jīng)元細胞內(nèi)鈣離子、線粒體活性及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)活性的影響。2 ．結(jié)果與結(jié)論2 ．1 清開靈有效組分及配伍對缺血再灌注海馬神經(jīng)元鈣超載的保護作用體外模擬缺血再

4、灌注1 2 小時，海馬神經(jīng)元細胞內(nèi)游離鈣離子明顯升高，缺血缺氧再灌注模型組與對照組比較細胞內(nèi)鈣離子明顯升高。梔子苷、黃芩苷、膽酸、珍珠母配伍藥物中大小兩個劑量對缺血缺氧再灌注后的神經(jīng)元均有降低胞漿鈣，明顯減輕缺氧神經(jīng)元鈣超載的作用，配伍藥緩解缺血缺氧后的鈣超載來調(diào)節(jié)細胞功能；可初步提供清開靈有效組分配伍保護神經(jīng)元的理論依據(jù)。單體實驗觀察到梔子苷有降低缺氧后細胞內(nèi)鈣離子濃度的作用。從而減輕缺血神經(jīng)元的鈣超載；梔子苷可能發(fā)揮了穩(wěn)定受損神經(jīng)元

5、功能，降低代謝合成水平而增強神經(jīng)元抵御缺氧能力的作用，黃芩苷、膽酸、珍珠母基本對缺血再灌后的海馬神經(jīng)元細胞內(nèi)鈣超載未顯示其阻抑作用2 ．2 清開靈有效組分及配伍對海馬神經(jīng)元線粒體活性的影響本實驗結(jié)果顯示加入梔子苷、黃芪苷、膽酸、珍珠母配伍藥物5 u l ／2 m l 后可以升高缺血再灌注后下降的海馬神經(jīng)元線粒體熒光值，提高海馬神經(jīng)元線粒體活性，阻抑缺血再灌注對神經(jīng)元的損傷。提示我們配伍藥物的作用靶點之一可能是通過改善線粒體的活性來增加能

6、量A T P 的生成利用，從而改善線粒體鈣庫攝取胞漿鈣離子的能力，通過減低鈣超載來阻斷延緩神經(jīng)元的損傷。缺血缺氧后海馬神經(jīng)元線粒體活性下降，面各單組分藥物組出現(xiàn)了不同的反應(yīng)結(jié)果：黃芩苷組線粒體熒光值顯著高于缺血模型組，梔子苷、珍珠母組各濃度與模型組活性相當，沒有顯示出保護作用；而膽酸2 5 u g ／m l 組線粒體活性低于模型組，出現(xiàn)了加重線粒體損傷的反作用；由此我們可推出，黃芩苷的保護海馬神經(jīng)元缺血再灌注的作用環(huán)節(jié)有線粒體途徑，黃芩