應用cDNA微陣列篩選人卵巢癌順鉑耐藥的基因標志譜.pdf

1、第一軍醫(yī)大學博士學位論文應用cDNA微陣列篩選人卵巢癌順鉑耐藥的基因標志譜姓名：曹漫明申請學位級別：博士專業(yè)：腫瘤學指導教師：張積仁20050516中文摘要驗依據。主要研究內容、方法和結果：(一)表達譜cDNA微陣列的制備。將從cDNA文庫中挑選的4000個靶基因進行PCR擴增和純化后制備成探針，然后將探針點樣子氨基玻片上，再經過點樣后水合、紫外交聯，制備成表達譜cDNA微陣列。(二)順鉑誘導卵巢癌COCI細胞基因表達的動態(tài)變化。化療敏

2、感的卵巢癌在多次化療后出現耐藥提示，獲得性耐藥的發(fā)生可能是化療過程中腫瘤細胞暴露于化療藥物后被誘導產生了耐藥亞型的結果。基于上述理論前提，我們在本部分研究中應用cDNA微陣列動態(tài)觀察了短暫暴露于順鉑后CocI細胞mRNA表達的變化，尋找順鉑作用下COCl細胞差異表達的基因，為下一步確定順鉑獲得性耐藥基因表達標志譜奠定基礎。具體方法為：分別取經10ug／ml順鉑孵育5h、10h、15h的COCl細胞和對照COCl細胞，抽提總RNA，分離純

3、化為mRNA，逆轉錄Cy5ICy3標記cDNA探針，與包含4000個人類基因的微陣列雜交，RTPCR驗證表達差異的基因。結果表明：在順鉑短暫作用于COCl細胞的3個時段(5—1015h)中，均可誘導凋亡，凋亡率的增加呈時間依賴性，在順鉑作用下，細胞被阻滯于G2期；此過程中在順鉑誘導5h時COCl細胞即產生基因表達的改變，至15h，共有522個基因差異表達，發(fā)生差異表達基因的數量的增加和部分基因的表達強度的變化呈時間依賴性，，這些基因的功

4、能涉及DNA復N／轉錄與損傷修復、細胞凋亡和信號轉導、癌基因，抑癌基因、細胞周期、細胞骨架以及細胞代謝等多方面，提示順鉑誘導卵巢癌COC。細胞產生的細胞毒反應和獲得性耐藥的發(fā)生是一個多基因、多環(huán)節(jié)、多途徑參與的過程。(三)卵巢癌順鉑耐藥細胞系COCl／DDP的建立及其基因表達譜分析。以順鉑為誘導劑，采用中等劑量(4ug／m1)、間歇作用法誘導5個月建立了人卵巢癌順鉑耐藥細胞系COCl／DDP，然后以其親本細胞COCl為對照，應用eDNA