米非司酮對乳腺癌細胞增殖與凋亡作用機制的研究.pdf

1、目的：近年來乳腺癌的發(fā)病率越來越高，每年新發(fā)病例大約130萬，死亡率也呈逐年上升趨勢，乳腺癌已經(jīng)成為嚴重威脅婦女生命安全的主要疾病之一。乳腺癌的治療除常規(guī)的手術、放射治療、化學治療外，內(nèi)分泌治療也越來越受到重視。在美國內(nèi)分泌治療約占55％，日本約為48％，而我國僅占4％。目前內(nèi)分泌治療藥物如三苯氧胺(TAM)、芳香化酶抑制劑等的療效已得到確認，但因其本身的諸多副作用(如TAM可導致子宮內(nèi)膜增厚，甚至子宮內(nèi)膜癌，并可導致血脂升高、血栓形成

2、、脂肪肝等；芳香化酶抑制劑長期服用可導致骨質(zhì)破壞等)，以及激素受體表達水平的不同，而大大限制了它們的臨床應用。能否有一種藥物可以替代上述藥物或與它們協(xié)同發(fā)揮抗腫瘤作用，并減少其副作用，這正是本研究的出發(fā)點。 米非司酮(mifepristone，MIF，RU486)是一種19-去甲睪酮衍生物，對孕激素受體(progesterone receptor,PR)、糖皮質(zhì)激素受體(glucoconicoid receptor，GR)有很

3、強的親和力。有研究發(fā)現(xiàn)，MIF具有抗腫瘤、增強抗癌藥物療效及其它新用途。孕激素在體外實驗中有刺激乳腺癌細胞增殖的作用，可能與乳腺癌的轉(zhuǎn)移有關<'[1]>，而MIF為孕激素受體拮抗劑，故可用于乳腺癌治療。體外實驗也發(fā)現(xiàn)孕激素拮抗藥或孕激素受體調(diào)節(jié)藥與抗雌激素或芳香化酶抑制藥聯(lián)合作用比單一作用有更強的抗腫瘤作用<'[2]>。已經(jīng)有研究證明米非司酮對PR陽性的乳腺癌細胞有抑制作用。以往多認為MIF的抗腫瘤作用與其抗孕激素作用有關，但是其在PR

4、陰性腫瘤中表現(xiàn)出的抗腫瘤作用表明MIF的抗腫瘤作用不是抗孕激素單一作用的結果，其作用機制遠比想象的復雜，即MIF可以在不同條件下通過不同的機制發(fā)揮作用。本課題設計了不同濃度的MIF，觀察其在體外環(huán)境下對ER(++)/PR(++)、ER(-)/PR(-)乳腺癌細胞系(MCF-7)生長、凋亡及與之相關的VEGF、bcl-2、Ki67、CerbB-2、P53等因子表達的影響。探討米非司酮對乳腺癌細胞生長、調(diào)亡的可能影響機制，為乳腺癌內(nèi)分泌治

5、療的研究提供新的思路。 方法：ER(++)/PR(++)、ER(-)/PR(-)乳腺癌細胞系各一株，RPMI1640培養(yǎng)液培養(yǎng)，經(jīng)4～5次傳代使生物學性狀穩(wěn)定后，對數(shù)生長期細胞分別接種至培養(yǎng)瓶、24孔板、96孔板。細胞貼壁后各自隨機分為空白對照組(加入MIF藥物溶劑，濃度1％)、藥物干預組(分六組，加入MIF，濃度分別為1.25μg/ml，2.5μg/ml，5.0μg/ml，10.0μg/ml，20.01μg/ml，40.0μg

6、/ml)。最長干預72小時。分別于干預24、48、72小時后倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)學變化；流式細胞儀測細胞調(diào)亡率；四唑鹽(MTT)比色法檢測細胞活力；免疫組織化學檢測ER、PR、VEGF、bel-2、Ki67、CerbB-2、P53等蛋白的表達水平；對比上述指標在兩組細胞之間的差異。 結果：(1)細胞形態(tài)學觀察結果：空白對照組細胞貼壁均勻的，狀態(tài)良好，各干預組貼壁細胞明顯減少，培養(yǎng)液內(nèi)細胞碎片增多，且隨著藥物劑量的增加和干預時

7、間的延長更明顯。(2)四唑鹽(MTT)比色試驗結果：各劑量組OD值較空白對照組顯著降低(p<0.01)，而且與干預劑量、干預時間成反比，有顯著統(tǒng)計學差異(p<0.01)。(3)流式細胞儀檢測結果：與空白對照組相比，各干預組早期調(diào)亡細胞所占比例顯著增加(p<0.01)，各劑量組間也 顯著差異(p<0.01)。(4)免疫組化結果：各組ER、PR表達無明顯差異，而VEGF、bcl-2、Ki67、CerbB-2、P53有顯著差異(p<0.01)

8、。(5)兩株細胞對比：藥物干預后，ER(++)/PR(++)組細胞各項調(diào)亡指標均比ER(-)/PR(-)組細胞有顯著差異(p<0.01)，細胞活力顯著降低。 結論：(1)米非司酮對ER(++)/PR(++)和ER(-)/PR(-)％腺癌細胞株的生長均有抑制作用。(2)米非司酮抑制乳腺癌細胞株的生長與其促進細胞凋亡有關，而且呈時間和劑量依賴性。(3)米非司酮抑制乳腺癌細胞的生長與其降調(diào)增殖相關因子水平有關。(4)米非司酮抑制乳腺癌