神經氨酸酶預處理供體骨髓細胞延長大鼠同種異體皮存活的研究.pdf

1、背景與目的：對于大面積深度燒傷患者而言，自體皮源不足的問題尤為突出，但移植排斥反應與應用免疫抑制劑的嚴重副作用之間的矛盾一直困擾著異基因皮膚移植的臨床應用。所以，如何延長異基因移植皮膚在燒傷創(chuàng)面的存活時間是燒傷早期創(chuàng)面處理研究的重要課題之一。肝臟位于胃腸道與腔靜脈系統(tǒng)之間，其獨特的解剖學位置和代謝內環(huán)境決定其在免疫調節(jié)中發(fā)揮重要的作用，而門靜脈穿刺操作復雜，又有許多并發(fā)癥發(fā)生的危險，使其臨床應用受到制約。 有研究表明，肝細胞表面

2、有無唾液酸糖蛋白的受體，而經神經氨酸酶(neuraminidase，Neu)預處理的淋巴細胞或骨髓細胞(bonemarrowcells，BMCs)表面則富含無唾液酸糖蛋白。因此經Neu預處理能增強淋巴細胞或BMCs對肝臟的親和性。本研究以大鼠為研究對象，觀察Neu預處理對BMCs經外周靜脈注射后在受體內的分布、造血集落及外周血嵌合體形成的影響，篩選出使dBMCs偏向性分于受體肝臟的Neu最適預處理濃度。并在此基礎上，探討Neu預處理供體

3、BMCs經外周靜脈輸注對異體皮膚存活的影響，預期尋求一種創(chuàng)傷小、易于操作而又安全可靠的免疫耐受誘導方法。 方法： 1.以Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠作為BMCs的供體，以Wistar雌性大鼠作為受體，采用四種不同濃度(0，0.5，1.0，2.0U/ml)的Neu預處理SD雄性大鼠dBMCs，以99Tcm-SnCl2法標記，經Wistar雌性大鼠尾靜脈注射，觀察dBMCs在受體內各主要組織器官的分布。

4、 2.實驗對象及分組同上，在尾靜脈輸注15天后取受體Wistar大鼠全身各主要器官行病理組織學觀察造血集落的形成情況；從受體外周血提出全血DNA，PCR擴增后凝膠電泳分析，檢測有無供體特異性的SRY的目的基因片斷。 3.在上述實驗基礎上，聯(lián)合短期應用環(huán)孢素A(CyclosporinA，CsA)，用SD大鼠(♂)作為BMCs和異體皮的供體，Wistar大鼠(♀)作為受體，觀察異體皮的存活情況。以此分析使BMCs偏向性分布于受體肝

5、臟內的最適預處理濃度能否誘導延長異體皮的存活時間。 結果： 1.以不同濃度Neu預處理，dBMCs在受體內各組織器官的分布形式類似，依次為：肝＞腎＞肺＞脾＞股骨＞心＞胸腺，但1.0U/ml組肝臟、腎臟、脾臟內的百分含量與對照組比較有顯著差別。 2.不同濃度Neu預處理的dBMCs于尾靜脈注射15天后，病理組織學觀察結果顯示，每組受體肝臟內均有髓系細胞和/或紅系細胞組成的造血集落形成，每個高倍鏡下造血集落數(shù)量上實驗

6、組與對照組之間無差別，形態(tài)上也類似，而其它器官(脾、胸腺、肺、腎、心)內未見造血集落形成。dBMCs輸注15天后，不同濃度預處理組部分受體內可檢測到供體Y染色體特異性的SRY基因序列，而對照組沒有檢測到。 3.對照組大鼠于術后8～9d皮片全部變干、變硬。聯(lián)合短期應用CsA后，dBMCs組和Neu-dBMCs組移植皮片的排斥反應多表現(xiàn)為表皮液化、脫落，存活時間延長。對照組、dBMCs組和Neu-dBMCs組異體皮片的MST((-x

7、)±s(-x))分別為(8.3±0.2)、(11.7±0.6)、(13.6±0.5)d。聯(lián)合短期應用CsA，dBMCs組及Neu-dBMCs組異體皮片的MST均與對照組有非常顯著的差異(P＜0.01)；Neu-dBMCs組的同種異體皮片成活時間較dBMCs組又明顯延長(P＜0.05)。 結論： 1.適當濃度的Neu預處理可增強經外周靜脈輸注的dBMCs在受體肝臟內的分布。 2.比較dBMCs在全身七個不同組織器官