miR-19b對H9c2細(xì)胞KCNA5基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的：探討miR-19b對H9c2細(xì)胞KCNA5基因表達(dá)及細(xì)胞活力的影響。
　　方法：
　　1、MicroRNA芯片分析AF與SR患者心房組織差異表達(dá)的miRNA。
　　2、生物信息學(xué)方法預(yù)測與AF相關(guān)基因可能存在靶向關(guān)系的miRNA，qRT-PCR法驗(yàn)證miRNA的表達(dá)水平。
　　3、Western blot法檢測AF與SR患者樣本中KCNA5蛋白的表達(dá)水平。
　　4、構(gòu)建GFP標(biāo)記的miR-19b質(zhì)粒，

2、通過慢病毒載體感染H9c2細(xì)胞。倒置熒光顯微鏡觀察H9c2細(xì)胞的GFP熒光表達(dá)情況。qRT-PCR法檢測miR-19b的表達(dá)水平。
　　5、Western blot法檢測H9c2細(xì)胞中KCNA5蛋白的表達(dá)水平，qRT-PCR法檢測KCNA5 mRNA的表達(dá)水平。
　　6、建立H2O2誘導(dǎo)的H9c2細(xì)胞損傷模型，用CCK-8法檢測miR-19b對H9c2細(xì)胞活力的影響；用流式細(xì)胞術(shù)檢測miR-19b對H9c2細(xì)胞凋亡的影響。<

3、br>　　結(jié)果：
　　1、MicroRNA芯片分析結(jié)果顯示，與SR患者比較，AF患者心房組織中差異表達(dá)的miRNA共有26個。
　　2、生物信息學(xué)方法預(yù)測發(fā)現(xiàn)，AF相關(guān)基因KCNA5與miR-19b可能存在靶向關(guān)系；qRT-PCR法檢測表明，與SR患者比較，AF患者中miR-19b表達(dá)減少。
　　3、Western blot法檢測顯示，與SR患者相比，AF患者中KCNA5的蛋白表達(dá)明顯增加。
　　4、倒置熒光顯微

4、鏡觀察表明，感染H9c2細(xì)胞的效率較高；qRT-PCR法檢測顯示，與對照組比較，miR-19b過表達(dá)組miR-19b表達(dá)水平明顯增加，miR-19b干擾組miR-19b表達(dá)水平明顯減少，miR-19b陰性對照組miR-19b表達(dá)水平未發(fā)生明顯變化。
　　5、Western blot法檢測顯示，與對照組比較，miR-19b過表達(dá)組KCNA5蛋白表達(dá)水平明顯減少；miR-19b干擾組KCNA5蛋白表達(dá)水平明顯增加；陰性對照組KCNA5