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1、目的:觀察低氧性肺動(dòng)脈高壓形成過(guò)程中大鼠肺組織中結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)的表達(dá)變化,以及低氧對(duì)離體培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞分泌CTGF的影響,探討CTGF在低氧性肺動(dòng)脈高壓中的作用。 方法:(1)將20只雄性SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組和低氧組。以常壓低氧復(fù)制肺動(dòng)脈高壓模型,右心導(dǎo)管插入法檢測(cè)平均肺動(dòng)脈壓(mPAP);分別稱量大鼠右心室(RV)和左心室加室間隔(LV+S)的重量,計(jì)算出右心室肥厚指數(shù)RV/(Lv+S);圖像分析法測(cè)量
2、肺小動(dòng)脈管壁厚度和面積,計(jì)算出肺小動(dòng)脈管壁厚度指標(biāo)即管壁厚度占血管外徑的百分比(WT%)和管壁面積占血管總面積的百分比(WA%);原位雜交和免疫組化法觀察肺小動(dòng)脈CTGF mRNA及蛋白的表達(dá),熒光PCR法觀察大鼠肺組織CTGF mRNA的表達(dá)。(2)低氧處理離體培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,采用熒光:PCR法檢測(cè)細(xì)胞中CTGFmRNA的表達(dá),酶聯(lián)免疫法檢測(cè)細(xì)胞上清液中CTGF濃度。 結(jié)果:(1)與對(duì)照組比較,低氧組大鼠平均肺動(dòng)脈壓(
3、mPAP)明顯升高(P<0.01)、肺小動(dòng)脈WT%、WA%以及RV/(LV+S)明顯增加(P<0.01)。低氧組大鼠肺組織CTGF mRNA水平、肺小動(dòng)脈CTGF mRNA及蛋白水平與對(duì)照組比較,CTGF mRNA表達(dá)則明顯上調(diào),肺小動(dòng)脈CTGF蛋白水平明顯增加(P<0.01)。相關(guān)分析顯示低氧后大鼠肺小動(dòng)脈CTGFmRNA及蛋白水平、肺組織CTGF mRNA水平與肺小動(dòng)脈WT%和WA%均呈明顯正相關(guān)(P<0.01)。(2)與對(duì)照組相比
4、,人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞在低氧培養(yǎng)6h后,其CTGF mRNA和蛋白表達(dá)無(wú)明顯變化(P>0.05),低氧12h后上述指標(biāo)明顯增加(P<0.05),24h后其增加則更加明顯(P<0.01)。同樣,細(xì)胞上清液中CTGF在缺氧6h即有明顯增加(P<0.05),12h達(dá)到高峰(P<0.01),24h稍有所下降,但仍高于常氧培養(yǎng)的細(xì)胞上清液中濃度(P<0.01)。 結(jié)論:(1)慢性低氧可以刺激CTGF的合成和釋放,CTGF可能參與了低氧性肺血管
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