唐菖蒲原生質體分離、純化及培養(yǎng)的研究.pdf

1、唐菖蒲(GladiolushybridusHort)是鳶尾科(Iridaceae)唐菖蒲屬(Gladiolus)多年生單子葉球根花卉，是世界著名的四大切花之一。唐菖蒲原生質體分離、純化及培養(yǎng)技術的研究將為唐菖蒲育種工作奠定基礎。 本試驗以唐菖蒲子球莖為材料，建立唐菖蒲原生質體分離、純化及培養(yǎng)體系。主要結果如下： 1.唐菖蒲子球莖誘導愈傷的培養(yǎng)基為：“超級玫瑰”MS+2,4-D3.0mg/L+6-BA0.5mg/L；“超級

2、粉”MS+2,4-D4.0mg/L+6-BA0.5mg/L；“藍精靈”MS+2,4-D4.0mg/L+6-BA0.5mg/L 2.三種類型唐菖蒲愈傷組織：Ⅰ型為近胚性愈傷，Ⅱ型為非胚性愈傷，Ⅲ型為中間型愈傷，其中Ⅰ和Ⅲ型愈傷組織培養(yǎng)2～3月后可得到胚性愈傷。胚性愈傷在MS+2,4-D2.0mg/L+6-BA0.5mg/L培養(yǎng)基上培養(yǎng)有利于唐菖蒲胚性愈傷的保持。 3.唐菖蒲懸浮培養(yǎng)細胞系的培養(yǎng)方法為：懸浮細胞的初始接種量為

3、2g/40ml，初始繼代周期2～3d，一個月后繼代周期為5～8d。在懸浮培養(yǎng)基中加入2mg/L的甘氨酸，100mg/L的谷氨酸、300mg/L的水解乳蛋白、100mg/L的酵母提取物、500mg/L的牛血清白蛋白有助于原生質體活力的提高。 4.露醇保持唐菖蒲原生質體滲透壓穩(wěn)定的濃度為0.6mol/L。 5.唐菖蒲葉片在0.6mol/L甘露醇中預處理1h分離得到的原生質體產(chǎn)量和活力較高；繼代培養(yǎng)2個月左右的懸浮培養(yǎng)細胞系分

4、離的原生質體產(chǎn)量和活力較高。 6.葉片和懸浮培養(yǎng)細胞分離原生質體所用酶液的配比濃度分別為Cellulase“Onzuka”RS1.5％+PectinaseY-230.5％和Cellulase“Onzuka”RS2.0％+PectinaseY-230.5％，酶解時間為2h，pH5.6；酶解的條件為：黑暗下27℃，于搖床上振蕩酶解(40r/min)。 7.原生質體培養(yǎng)的方法為先液體后包埋法，其培養(yǎng)基分別為：葉片“超級玫瑰”K

5、M8P+2,4-D1.0mg/L,+NAA0.2mg/L+KT0.2mg/L，“超級粉”KM8P+2,4-D1.5mg/L+NAA0.2mg/L+ZT0.2mg/L，“藍精靈”KM8P+2,4-D2.5mg/L+KT0.2mg/L+6-BA0.1mg/L；懸浮培養(yǎng)細胞“超級玫瑰”KM8P+2,4-D2.0mg/L+NAA0.2mg/L+KT0.2mg/L，“超級粉”KM8P+2,4-D2.5mg/L+NAA0.2mg/L+ZT0.2mg