蘭州鲇微衛(wèi)星多態(tài)性及生長相關(guān)基因分析.pdf

1、蘭州鲇(Silurus lanzhouensis)，又名黃河鯰，是黃河中上游特有的優(yōu)質(zhì)經(jīng)濟魚類，因其肉質(zhì)細嫩、刺多肉少、營養(yǎng)價值高等優(yōu)點，深受養(yǎng)殖戶和消費者的喜愛，市場需求量大，消費市場前景廣闊。但是目前蘭州鲇野生種群數(shù)量日益減少，養(yǎng)殖群體選育程度較低。鑒于此，本研究采用EST-SSR標記技術(shù)開展蘭州鲇遺傳多樣性研究;運用基因克隆技術(shù)開展蘭州鲇核糖體蛋白質(zhì)L15(RPL15)基因完整CDS區(qū)、生肌決定因子Myf5（Myf5）基因部分CD

2、S區(qū)生物信息學分析，同時采用實行熒光定量法分析上述兩個基因在蘭州鲇8個不用組織、不同性別個體間的表達;采用TA克隆和單鏈構(gòu)象多態(tài)性的方法，分析蘭州鲇生肌決定因子MyoD(MyoD)基因、肌細胞生成素MyoG(MyoG)基因的SNPs和多態(tài)性，篩選出與生長有關(guān)的標記位點。通過以上研究為今后蘭州鲇分子標記輔助選育和基因工程育種技術(shù)奠定了一定的理論基礎(chǔ)和技術(shù)支撐，并取得以下研究結(jié)果:
　　試驗一:獲得218個EST-SSR序列，GenB

3、ank登錄號:JZ84579-JZ845687;JZ845227-JZ845367;81個不含SSR的EST序列，GenBank登錄號:JZ845478-JZ84559。根據(jù)側(cè)翼序列設(shè)計出299對引物，選取53對進行擴增檢驗，有22對引物可擴增出目的條帶，用PAGE-銀染法在100尾蘭州鲇個體間進行多態(tài)性檢測，發(fā)現(xiàn)11個EST-SSR位點具有多態(tài)性。
　　試驗二:首次克隆測序獲得蘭州鲇RPL15基因的完整CDS區(qū)序列長度為615b

4、p(GenBank登錄號:KT1969343)和My f5基因的部分cDNA序列長度為477 bp(GenBank登錄號:KT580948)。RPL15基因編碼由355個氨基酸殘基組成的可溶堿性蛋白質(zhì)。通過熒光定量PCR分析蘭州鲇RPL15基因主要在腦組織和肝組織中特異性表達，且腦組織和肝組織極顯著的高于其它組織(P＜0.01)。腦組織RPL15的表達雌魚顯著高于雄魚(P＜0.05)。
　　蘭州鲇Myf5基因編碼由122個氨基酸殘

5、基組成的可溶酸性蛋白質(zhì)。蘭州鲇Myf5基因主要在肌肉組織中特異性表達;雌雄異體間的表達，肌肉組織Myf5的表達雄魚顯著高于雌魚(P＜0.05)。
　　試驗三:MyoD基因僅在第1外顯子中發(fā)現(xiàn)1處突變G250A。MyoD有3種基因型(AA、BB和AB)。體重、體高表型值以AB基因型的為最高，以BB基因型的為最低，且3種基因型所對應(yīng)的表型值組間差異顯著(P＜0.05)。體長表型值在3種基因型中表現(xiàn)出AA＞AB＞BB的關(guān)系，且不同基因型