哮喘神經(jīng)內(nèi)分泌免疫網(wǎng)絡(luò)紊亂及補(bǔ)腎益氣藥對(duì)其調(diào)節(jié)作用的研究.pdf

1、本文研究哮喘模型大鼠不同時(shí)期下丘腦一垂體一腎上腺軸(Hypothalamic—Pituitary—AdrenalAxis，HPAA)的變化規(guī)律及其與免疫炎性因子的相關(guān)性；研究補(bǔ)腎益氣中藥在哮喘防治中的作用機(jī)制。 方法： 實(shí)驗(yàn)I：以卵蛋白(ovalbumin，OA)致敏和激發(fā)BrownNorway大鼠制作哮喘模型。實(shí)驗(yàn)分5組，每組8只。A組：生理鹽水對(duì)照組：正常BN大鼠，以生理鹽水代替卵蛋白致敏和霧化吸入1次；B組：哮喘即

2、發(fā)組：以O(shè)A激發(fā)哮喘1次，激發(fā)20分鐘后即刻取標(biāo)本檢測(cè)；C組：哮喘7天組(模型鼠連續(xù)激發(fā)7天，每天1次，每次持續(xù)20分鐘)；D組：哮喘緩解7天組(同C組處理后，緩解7天)；E組：哮喘反復(fù)發(fā)作組(發(fā)作7天，緩解7天，再發(fā)7天)。所有大鼠在最后一天霧化吸入卵蛋白后半小時(shí)麻醉采標(biāo)本。采用RT一PCR檢測(cè)下丘腦組織中的促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素CRHmRNA，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme¨nkedimmunosorbentassay，ELISA

3、)檢測(cè)工L一6、IL-4、IFN—Y和皮質(zhì)酮(corticosterone，CORT)，放射免疫法(Radio—immunityassay，RIA)檢測(cè)ACTH。 實(shí)驗(yàn)Ⅱ：造模方法同實(shí)驗(yàn)I的E組。F組：模型對(duì)照組；G組：低劑量中藥組；H組：中劑量中藥組；I組：高劑量中藥組。在緩解期的第一天給藥，共14天。G、H、l組分別給予不同劑量補(bǔ)腎益氣藥(淫陽(yáng)藿、黃芪組成)。F組給予等劑量的生理鹽水灌胃。檢測(cè)指標(biāo)和方法同實(shí)驗(yàn)一。 結(jié)

4、果： 實(shí)驗(yàn)I： 1．HPAA的變化： 經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換5組CRHmRNA比較差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．01)。其中兩兩比較，哮喘l天組較生理鹽水對(duì)照組明顯升高(P<0．01)。哮喘反復(fù)發(fā)作組、哮喘7天組和緩解期組分別與哮喘1天組比較CRHmRNA均明顯降低(P<0．01)。 經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換5組ACTH比較差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)。其中，卵蛋白激發(fā)哮喘1天組ACTH較生理鹽水對(duì)照組有上升趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意

5、義。反復(fù)發(fā)作的哮喘組ACTH明顯降低，與哮喘1天組和緩解期組比較差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．0D。 兩兩比較緩解期組和反復(fù)發(fā)作組CORT與哮喘1天組比較明顯降低，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)。 2．細(xì)胞因子的變化 方差分析結(jié)果顯示5組比較IL一4差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．01)。兩兩比較，哮喘7天組、緩解期組和反復(fù)發(fā)作組分別與哮喘1天組比較IL一4明顯升高，(P<0．05)；哮喘緩解期組和反復(fù)發(fā)作組分別與

6、生理鹽水對(duì)照組比較IL一4明顯升高(P<0．05)。 5組比較IFN—Y具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0．01)。兩兩比較哮喘7天組、緩解期組分別與哮喘1天組比較IFN—γ明顯降低(P<0．01)；哮喘緩解期組與生理鹽水對(duì)照組比較IFN—Y明顯降低，(P<0．05)。其余各組兩兩比較差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0．05)。 IL一6方差分析結(jié)果顯示5組比較差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．01)。兩兩比較哮喘7天組與哮喘1天組比較IL一6明顯

7、升高(P<0．05)；哮喘緩解期組與哮喘1天組比較IL一6顯著升高，(P<0．01)；哮喘反復(fù)發(fā)作組與其余各組兩兩比較兒一6明顯升高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3．IL一6與HPAA的相關(guān)性：經(jīng)相關(guān)性檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)IL一6與ACTH顯著負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)r=一0．325，P=O．043，而IL一4與ACTH經(jīng)相關(guān)性檢驗(yàn)結(jié)果顯示兒一4與ACTH無(wú)相關(guān)性，r=一O．053，P=0．747。 4．Th1／Th2細(xì)胞因子相關(guān)性：IL一4與IF

8、N—γ數(shù)據(jù)經(jīng)相關(guān)性檢驗(yàn)顯示兩者呈顯著負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)r=一0．339，P=0．017。 實(shí)驗(yàn)： 1.補(bǔ)腎益氣藥對(duì)HPAA的調(diào)節(jié)作用：在三個(gè)用藥組之間，隨劑量增加，CRHmRNA呈上升趨勢(shì)，且高劑量中藥組與對(duì)照組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)。高劑量中藥組和中劑量中藥組與低劑量中藥組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)。 隨藥物劑量增加，ACTH水平呈上升趨勢(shì)。其中中劑量中藥組與對(duì)照組和低劑量中藥組比較差

9、異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)；高劑量中藥組與對(duì)照組和低劑量中藥組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)。隨用藥劑量增加，CORT呈上升趨勢(shì)，其中兩兩比較高劑量中藥組與對(duì)照組比較差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)。 2．補(bǔ)腎益氣藥對(duì)細(xì)胞因子的影響：經(jīng)方差分析結(jié)果提示各組IL一6、IL一4、IFN—Y比較差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其中兩兩比較IFN—Y中劑量組較對(duì)照組明顯降低，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論： 哮喘初發(fā)時(shí)HP

10、AA功能活躍，而反復(fù)發(fā)作的慢性階段，HPAA功能相對(duì)低下，神經(jīng)內(nèi)分泌激素和糖皮質(zhì)激素分泌減少，兒一4合成增加，IFN—Y減少，這種改變使得哮喘的內(nèi)源性抗炎成分減少，致炎因子增加，慢性炎癥進(jìn)展；而IL一6合成增加可能是繼發(fā)于HPAA功能低下，形成對(duì)HPAA的反饋性調(diào)節(jié)，有望作為腎陽(yáng)虛微觀辯證的指標(biāo)之一。中藥補(bǔ)腎益氣藥可調(diào)節(jié)哮喘HPAA的功能紊亂，上調(diào)CRH、ACTH和CORT的表達(dá)合成，作用靶點(diǎn)在下丘腦或下丘腦以上。該中藥有望進(jìn)一步應(yīng)用于