黃芪總苷對脾虛大鼠胃壁細胞功能及形態(tài)影響的研究.pdf

1、目的：檢測大黃脾虛大鼠壁細胞內(nèi)鈣調(diào)素Ca2+/CaM活性，并探討AST對其影響。 方法：大鼠壁細胞的分離與純化采用我室建立的常規(guī)方法，Ca2+/CaM活性檢測采用環(huán)核苷酸磷酸二酯酶(PDE)法[1]。 結果：脾虛大鼠壁細胞內(nèi)Ca2+/CaM活性明顯高于正常大鼠；經(jīng)過AST作用后，脾虛大鼠壁細胞內(nèi)Ca2+/CaM活性均有不同程度的下降，并呈現(xiàn)劑量依賴關系。 結論：脾虛大鼠壁細胞內(nèi)Ca2+/CaM活性的增高，這可能是

2、壁細胞處于一種代償?shù)臓顟B(tài)。不同劑量的AST可不同程度逆轉脾虛大鼠壁細胞內(nèi)Ca2+/CaM活性的增高，降低高代償?shù)乃健?引言鈣調(diào)素(Calmodulin，CaM)廣泛存在于真核細胞內(nèi)，參與細胞許多生理功能的調(diào)控，是胞內(nèi)Ca2+作用的重要靶標之一，Ca2+通過與CaM結合從而激活下游靶酶而發(fā)揮生理功能或作用[2,3]。CaM也作為許多藥物的受體而發(fā)揮藥物的干擾作用，影響CaM的活性是某些藥物作用的重要環(huán)節(jié)。在壁細胞中，CaM為胃泌

3、素受體后信息傳遞的重要物質(zhì)。 我們之前的研究顯示：大黃脾虛大鼠壁細胞GR結合位點數(shù)下降，壁細胞靜息狀態(tài)下[Ca2+]i明顯低于正常大鼠，經(jīng)過GAS刺激后[Ca2+]i亦明顯低于正常組；采用AST體外孵育對脾虛大鼠壁細胞下降的GR結合位點數(shù)有顯著上調(diào)作用，對靜息狀態(tài)下及GAS刺激下[Ca2+]i有一定升高，并呈現(xiàn)劑量依賴關系。提示脾虛狀態(tài)下壁細胞受體后胞內(nèi)信號轉導在Ca2+這一環(huán)節(jié)上可能存在障礙，而AST有調(diào)節(jié)的作用。本研究在原實

4、驗基礎上對即時分離的脾虛大鼠胃壁細胞Ca2+/CaM活性進行測定，并探討AST的作用。 1材料 1.1試驗藥物AST及大黃液同實驗一。 1.2試劑胃泌素標準品[Leu15]Gastrin-17(Sigma)及鏈霉蛋白酶(pronase，Sigma)、鈣調(diào)素(CaM)、磷酸二酯酶(PDE)標準品(Sigma)、環(huán)磷酸腺苷(cAMP)均由北京鼎國試劑公司提供，孔雀石綠由華美公司提供。 1.3儀器UV-754型

5、紫外分光光度計(上海第三分析儀器廠)，HZS-H恒溫水浴振蕩器(哈爾濱東聯(lián)電子有限公司)，XDS-1倒置顯微鏡(重慶光電儀器廠)，TDZ5-WS低速目的：探討脾虛大鼠胃粘膜表面上皮細胞超微結構的改變和AST可能發(fā)揮的作用。方法：采用掃描電鏡觀察脾虛大鼠胃粘膜表面上皮細胞超微結構的變化；觀察AST預防性給藥和治療給藥對其影響。 結果：脾虛大鼠胃粘膜上皮細胞壞死、破碎、形態(tài)模糊不完整；細胞游離面微絨毛稀少、脫落，分泌顆粒稀少；細胞之

6、間的間隙增寬；多個細胞融合扭曲成團；胃小凹結構不清晰、畸形增寬。AST預防性給藥和造模之后治療給藥，都能夠扭轉脾虛大鼠胃粘膜上皮的病變；并且高劑量預防組作用優(yōu)于低劑量預防組。 結論：脾虛大鼠胃粘膜表面上皮細胞的完整性受到破壞。其細胞表面微絨毛稀少、脫落以及分泌顆粒稀少的現(xiàn)象，間接地反映了上皮細胞分泌中性糖蛋白的功能下降，說明胃粘膜屏障的兩個重要解剖學基礎受到破壞。AST具有保護胃粘膜屏障的作用。 引言在胃粘膜的自我保護中

7、，由緊密排列的上皮細胞和上皮細胞分泌的粘液層構成的胃粘膜屏障具有重要的防御作用。由于AST對脾虛證胃腸粘膜形態(tài)學變化具有一定的保護作用，能夠減輕脾虛大鼠胃、腸粘膜出現(xiàn)的病理改變，本研究繼續(xù)從胃粘膜屏障的變化探討脾虛大鼠胃粘膜上皮細胞超微結構的改變和AST可能發(fā)揮的作用。 1材料 1.1藥物同實驗一。AST用生理鹽水配成兩個濃度分別為50、100mg/ml，備用。 1.2動物SPF級SD大鼠，雄性，體重190g～2

8、30g，購自廣東省衛(wèi)生廳實驗動物場，動物合格證號：0010487。 1.3儀器掃描電鏡型號：LEO-1430VP 2方法 2.1動物分組與給藥大鼠飲食不限，適應性飼養(yǎng)3d后，隨機分成5組。正常對照組：每日上午9時、下午4時喂飼蒸餾水1ml/100gBW，同時于上午腹腔注射與AST等體積的生理鹽水一次，連續(xù)14d。脾虛模型組：大鼠灌胃100％大黃液1ml/100gBW，每天兩次，時問同前；同時于上午腹腔注射與AST

9、等體積的生理鹽水一次，連續(xù)14d。脾虛AST預防組(設高、低劑量組)：大鼠灌胃100％大黃液1ml/100gBW，每天兩次，時間同前；同時于上午腹腔注射AST一次，劑量分別為100mg/kgBW、200mg/kgBW，連摘要目的：探討脾虛大鼠壁細胞、主細胞超微結構的改變和AST的影響。 方法：采用透射電鏡觀察脾虛大鼠壁細胞、主細胞超微結構的改變，并觀察AST預防性給藥和治療給藥對其影響。 結果：脾虛大鼠壁細胞的分泌小管明

10、顯擴張，腔內(nèi)微絨毛數(shù)量稀少、脫落、受壓；微囊泡數(shù)量減少，形態(tài)不規(guī)則；線粒體數(shù)量和形態(tài)正常。主細胞細胞核呈不規(guī)則形態(tài)，核萎縮，核內(nèi)異染色質(zhì)增多，常染色質(zhì)減少，核膜與胞質(zhì)之間的間隙增寬、出現(xiàn)空泡；糙面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)增寬、擴張，核糖體顆粒脫落、減少，酶原顆粒界膜不清晰，線粒體的改變同樣不明顯。AST預防性給藥及造模之后治療給藥，都能夠扭轉脾虛大鼠壁細胞、主細胞超微結構的病變。 結論：脾虛大鼠壁細胞、主細胞的超微結構都發(fā)生了明顯的改變，AST預