HIV-1囊膜糖蛋白gp41核心結構域基因的表達及其單克隆抗體的制備.pdf

1、該研究首先運用原核表達系統(tǒng)表達了N51(L6)C46多肽,并用能特異識別HIV-1 gp41三聚體特征性的六股α-螺旋束核心結構空間構型的MAb NC-1進行Western blot鑒定,證實N51(L6)C46多肽單體(14KDa)及其三聚體(36KDa)與MAb NC-1反應,提示該多肽可形成gp41核心結構空間構型特征,結構穩(wěn)定,SDS、二巰基乙醇的存在并不影響其空間構型的形成,可作為制備針對gp41核心結構空間構型MAb的免疫原

2、.采用N51(L6)C46多肽免疫小鼠制備了針對N51(L6)C46多肽的4株MAb,其中MAb 1A2、1A4和1B9針對多肽單體,MAb 3A1針對多肽三聚體.利用ELISA間接夾心法進一步鑒定了MAb的特異性,包被兔抗N36(L6)C34抗體,特異吸附多肽后再檢測雜交瘤細胞培養(yǎng)上清,結果顯示這4株抗體都不同程度地與兔抗N36(L6)C34捕獲的抗原反應,證實它們能特異識別表達多肽,但這4株MAb不與單獨的N36或C34多肽片段反應

3、,提示它們是抗多肽空間構象的MAb.將這4株MAb與MAb NC-1的抗體相對親和力作比較,其高低依次為NC-1>1B9>1A2>3A1>1A4.位點相加和競爭ELISA法分析其抗原表位,發(fā)現(xiàn)這4株MAb與MAbNC-1識別的抗原表位近似,但也存在一些差異.其中識別多肽單體的MAb 1A2、1A4、1B9和MAb NC-1識別的抗原表位較接近,而識別多肽三聚體的MAb 3A1與其它4株抗體識別表位差異均相對較大.上述4株MAb有可能成為