肝再生磷酸酶3對膠質瘤細胞增殖和遷移能力的影響.pdf

1、背景:目前研究顯示，肝再生磷酸酶3(PRL3)對多種腫瘤細胞的存活、增殖、侵襲、轉移具有促進作用，但是具體機制不詳，尤其是該分子在腦膠質瘤細胞的增殖和轉移中發(fā)揮的作用及其機制未見闡明。此文是關于PRL3與腦膠質瘤細胞相關的一些研究。
　　目的:篩選PRL3在細胞中相結合的蛋白，為進一步研究PRL3在信號通路中的作用分子機制提供支持。研究PRL3基因過表達和沉默對腦膠質瘤細胞增殖和遷移能力的影響。
　　方法:pGEX-6P-1

2、-PRL3原核表達載體，誘導GST-PRL3融合蛋白表達并純化該蛋白，利用pull-down技術篩選小鼠神經細胞中與PRL3相互作用的分子，質譜鑒定與PRL3相互作用蛋白。構建重組pcDNA3.1-PRL3真核表達載體，建立PRL3基因過表達體系，用pcDNA3.1作對照;同時設計并合成siRNA，構建siRNA-pSilencer3.1重組質粒，建立PRL3基因沉默體系，用pSileneer3.1作對照，四組質粒分別瞬時轉染腦膠質瘤U

3、251細胞，經細胞計數、劃痕分析等實驗觀察細胞的增殖和遷移能力。
　　結果:(1)pull-down結果顯示，在小鼠腦組織裂解液中有四個未知蛋白條帶，質譜鑒定出新的與PRL3相互作用的分子。(2)與對照組相比，PRL3基因過表達的腦膠質瘤U251細胞數量增多，遷移加快;而PRL3基因沉默后腦膠質瘤細胞數量減少，但遷移無明顯變化。
　　結論:在小鼠腦組織中篩選出了4種與PRL3相互作用的分子，其中一種經鑒定為Tubulin-b