幽門螺桿菌napA基因的克隆表達和免疫原性的初步研究.pdf

1、幽門螺桿菌(Helicobacter pylori， H pylori，Hp)是一種微需氧革蘭氏陰性螺旋桿菌，在全球人13中的感染率超過50％。H.pylori感染是慢性胃炎和消化性潰瘍的主要病因，與胃癌、胃粘膜相關(guān)性淋巴樣組織(Mucosa-associatedlymphoid tissue，MALT)淋巴瘤的發(fā)生密切相關(guān)，被WHO確定為I類致癌因子。研制疫苗將是控制H．pylori感染及相關(guān)疾病經(jīng)濟有效的途徑。 幽門螺桿菌中

2、性粒細(xì)胞激活蛋白(H．pylori neutropphil-activatingprotein，HP-NAP)位于細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)中，可通過細(xì)菌自溶而釋放，并附著在細(xì)菌外膜表面，介導(dǎo)了H. pylori與細(xì)胞表面的結(jié)合。其能夠趨化和激活中性粒細(xì)胞，導(dǎo)致炎癥。而最新實驗表明，HP-NAP在酸性條件下，能夠結(jié)合甚至濃縮DNA，以保護DNA免受宿主環(huán)境的損傷。可見，HP-NAP在H-pylori的粘附、定植，以及引起的炎癥反應(yīng)中都起到重要作用，是H

3、-pylori重要的致病因子之一。本實驗嘗試了采用基因工程的方法獲得NAP蛋白，并對其免疫原性進行了初步的研究。 用PCR從標(biāo)準(zhǔn)株Hp 26695基因組中擴增napA基因，并構(gòu)建原核表達載體pET28a-nap。測序證實克隆片段與GenBank公布序列完全一致。優(yōu)化表達條件后，pET28a-nap在大腸桿菌中獲得大量表達，表達量占菌體蛋白總量的40％。經(jīng)Chelating．F．F．親和柱層析Sephacryl S-200分子篩柱