云南煙草病毒檢測(cè)及防治研究.pdf

1、煙草病毒病是危害煙葉生產(chǎn)最重要的病害之一，危害煙草的病毒種類多達(dá)30多種，花葉型病毒病田間常見(jiàn)，曲葉型病毒病的危害呈上升趨勢(shì)。為了弄清云南煙草病毒病的種類，對(duì)云南省煙草花葉型和曲葉型病毒病樣品進(jìn)行了血清學(xué)和分子檢測(cè)，并對(duì)煙草病毒病控制進(jìn)行了研究。 采用抗原直接包被法和雙抗體夾心法對(duì)采自云南煙草花葉病樣本進(jìn)行了病毒種類檢測(cè)，并利用三抗體夾心法對(duì)黃瓜花葉病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)的亞組類型進(jìn)行了鑒定。

2、在云南采集的520個(gè)病毒病樣本中，煙草花葉病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、CMV和馬鈴薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)總檢出率分別為71.74％、55.01％和6.35％，云南、湖南和福建64個(gè)CMV陽(yáng)性樣品中，屬亞組Ⅰ的樣品為57個(gè)，占89.1％，屬亞組Ⅱ樣品為10個(gè)，占15.6％。 采用煙草曲莖病毒(Tobacco curly shoot viruse TbCSV)、云南煙草曲葉病毒

3、(Tobacco leaf curl Yunnan virus,TbLCYNV)、中國(guó)番茄黃化曲葉病毒(Tomato yellow leaf curl China virus,TYLCCNV)的特異引物，對(duì)云南煙草曲葉病樣本的病原進(jìn)行了PCR檢測(cè)；采用粉虱傳雙生病毒PA和PB通用引物，對(duì)代表性樣品進(jìn)行了擴(kuò)增、克隆測(cè)序和序列比對(duì)。檢測(cè)表明云南煙草曲葉病是由TbCSV、TbLCYNV和TYLCNV三種病毒引起的。109個(gè)煙草曲葉癥狀的樣本中

4、，TbCSV總檢出率為41.3％、TbLCYNV總檢出率為16.5％、TYLCNV總檢出率為53.2％。其中兩種或三種病毒復(fù)合侵染的檢出率為8.2％。500 bp序列比較表明，這些病毒分離物之間的相似性為77％～100％。依據(jù)500 bp序列構(gòu)建的同源關(guān)系樹(shù)上，所有TYLCCNV的分離物因地理隔離聚為兩大類，一類為保山分離物，相互間核苷酸序列相似性為93％，另一類為文山和紅河分離物，相互間核苷酸序列相似性為95％，兩類之間核苷酸序列相似

5、性為89％。 對(duì)其中一個(gè)分離物Y264.DNA-A的全序列測(cè)定表明，Y264 DNA-A全長(zhǎng)2741個(gè)核苷酸(nts)。具有典型的begomoviruses結(jié)構(gòu)，共編碼6個(gè)開(kāi)放讀碼框(ORFs)。DNA-A全長(zhǎng)與中國(guó)番茄黃化曲葉病毒分離物Y10的相似性最高，為91.3％，各ORFs編碼的氨基酸序列與TYLCCNV的相似性最高。因此，Y264為TYLCCNV的一個(gè)分離物。 采用三抗體夾心法對(duì)云南煙草漂浮苗樣本進(jìn)行了病毒種類

6、檢測(cè)，在云南采集的1400多個(gè)煙草漂浮苗樣本中，TMV的檢出率占總陽(yáng)性樣本數(shù)的95％以上；CMV和馬鈴薯Y屬病毒(包括PVY和TEV)的檢出率占總陽(yáng)性樣本數(shù)的5％以下。在漂浮苗移栽后至團(tuán)棵期，在發(fā)病率高(20％以上)的田塊中采集的480個(gè)花葉病樣本中，不同田塊TMV檢出率48.1％～100％，而CMV和馬鈴薯Y屬病毒(包括PVY和TEV)檢出率0％～12.2％。表明危害云南煙草漂浮苗的主要病毒種類為TMV。采用半葉法測(cè)定了9種藥劑對(duì)煙草

7、病葉汁液中TMV的鈍化效果，采用葉面噴霧法測(cè)定了藥劑對(duì)煙草的藥害濃度與藥害癥狀。室溫下一定濃度的藥劑與1：10000的TMV病葉汁液等體積混合3 min時(shí)，30％有效氯漂白粉10倍液、98％磷酸三鈉·12H<,2>0 10倍液、7％有效氯次氯酸鈉150倍液、美國(guó)消毒劑125倍液和75％酒精TMV的抑制率可達(dá)100％；10％二氧化氯200倍液和40％育寶150倍液與TMV混合30 min時(shí)對(duì)TMV的抑制率可達(dá)100％和96.30％；0.6

8、％菌毒凈125倍液、3.95％病毒必克800液和24％毒消800倍液與TMV混合30 min時(shí)對(duì)TMV的抑制率低于80％。除0.6％菌毒凈較安全外，供試消毒劑在常用濃度下接觸煙草葉片，產(chǎn)生較嚴(yán)重藥害，癥狀因消毒劑種類不同，主要為褪綠斑點(diǎn)、壞死斑點(diǎn)和畸形。 試驗(yàn)了在漂浮育苗池中使用消毒劑對(duì)TMV的鈍化效果和煙苗出苗和生長(zhǎng)的影響?？莅呒闹鳒y(cè)定表明：與TMV病葉汁液2萬(wàn)倍稀釋液接觸12 hr，對(duì)TMV的抑制率高于80％的消毒劑及濃度為

9、：30％有效氯漂白粉15 mg/L和150 mg/L；7％有效氯次氯酸鈉2 μl/L和20μl/L；美國(guó)消毒劑5μL/L和50μl/L。漂浮池水中加入低濃度消毒劑，出苗率和成苗率與對(duì)照差異不顯著，但對(duì)煙苗后期長(zhǎng)勢(shì)的影響因消毒劑種類而有差異。對(duì)煙苗長(zhǎng)勢(shì)有促進(jìn)作用的消毒劑有：磷酸三鈉15 mg/L～300mg/L、硫酸銅50 mg/L～100 mg/L、高錳酸鉀10 mg/L～40 mg/L和24％毒消10μl/L。對(duì)煙苗長(zhǎng)勢(shì)低濃度無(wú)明顯影