瘤胃微生物Real Time PCR定量方法的建立及其應(yīng)用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本研究分別以產(chǎn)甲烷菌、原蟲和瘤胃細菌為例,根據(jù)其16S/18SrDNA序列、ITS序列和特有蛋白的基因序列,利用RealTimePCR技術(shù),分別在種和類的水平上,建立了對瘤胃微生物絕對定量與相對定量的分子生物學方法,為瘤胃微生物的研究提供了一種快速、準確的方法。同時,應(yīng)用此方法研究了植物油對瘤胃中產(chǎn)甲烷菌數(shù)量、氫化細菌數(shù)量及原蟲數(shù)量的影響,探討了植物油降低瘤胃微生物甲烷產(chǎn)量的途徑?! ±肁ccⅠ、EcoRⅠ,PstⅠ、PvuⅡ、Sa

2、cⅠ、SmaⅠ等6種限制性內(nèi)切酶將基因組酶切,通過Southern雜交確定M.formicicum的16SrDNA序列在基因組中有2個拷貝?! ∫訧TS為靶序列,采用SYBRGreenⅠ熒光染料RealTimePCR法成功對M.mazei進行了定量檢測,有效檢測靈敏度可達300拷貝/25μL體系。同時,以微生物合成甲烷過程中的關(guān)鍵酶mcrA基因為靶基因,采用SYBRGreenⅠ熒光染料RealTimePCR法,建立了瘤胃總產(chǎn)甲烷菌相對

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