甘草、桔梗“藥對(duì)”藥效學(xué)環(huán)節(jié)之配伍機(jī)理研究（Ⅱ）.pdf

1、中藥復(fù)方配伍規(guī)律研究，是目前亟待解決的技術(shù)難題，從復(fù)方最小單位“藥對(duì)”入手研究配伍規(guī)律，符合從易到難的研究思路，是復(fù)方研究的基礎(chǔ)所在。本課題以仲景名方“桔梗湯”(后世多稱(chēng)為“甘桔湯”)主要物質(zhì)基礎(chǔ)——甘草皂苷和桔梗皂苷為具體研究對(duì)象，以?xún)烧吖餐幮А寡鬃饔脼橹饕疾橹笜?biāo)，祛痰作用為輔助，圍繞兩者合用的毒性變化、藥效維持時(shí)間以及藥效強(qiáng)度展開(kāi)，采用幾種國(guó)內(nèi)外成熟的藥物相互作用評(píng)價(jià)方法—金氏Q值法、改良的等高線法以及中效法，配合已開(kāi)發(fā)的相

2、應(yīng)軟件，對(duì)兩者合并使用結(jié)果的性質(zhì)進(jìn)行評(píng)價(jià)，以期達(dá)到以下目的：一則通過(guò)合用性質(zhì)定量化，從而揭示甘草皂苷與桔梗皂苷合用的內(nèi)在聯(lián)系，闡明配伍優(yōu)于單方的內(nèi)在原因，為臨床應(yīng)用提供科學(xué)的用藥依據(jù)；二則尋找到適合中藥部位合用研究的設(shè)計(jì)和評(píng)價(jià)方法，并探索中藥“藥對(duì)”配伍規(guī)律的研究思路與方法，為進(jìn)一步研究中藥復(fù)方提供可能。 研究結(jié)果如下：1毒性拮抗研究動(dòng)物預(yù)先給予一定劑量甘草皂苷(我們稱(chēng)其為“甘草化”過(guò)程)，可明顯降低給予致死量桔梗皂苷后動(dòng)物的死

3、亡率(死亡率曲線明顯右移)，桔梗皂苷LD50顯著提高。提示，中藥解毒研究應(yīng)當(dāng)采用適合中藥臨床用藥特點(diǎn)的新方法。 2時(shí)間協(xié)同研究小鼠氣管酚紅排泌、二甲苯致耳腫脹以及PLA2致足跖腫脹模型中，甘草皂苷與桔梗皂苷合用可明顯延長(zhǎng)藥效持續(xù)時(shí)間，體現(xiàn)“時(shí)間協(xié)同”特點(diǎn)。金氏Q值法評(píng)價(jià)“時(shí)間協(xié)同”出現(xiàn)時(shí)間點(diǎn)的合用性質(zhì)，顯示出協(xié)同或相加的結(jié)果。 3強(qiáng)度協(xié)同研究3.1體內(nèi)研究甘草皂苷、桔梗皂苷以及兩者合用在一定劑量范圍內(nèi)皆能抑制PLA2所致

4、的小鼠足跖腫脹，并呈劑量依賴(lài)關(guān)系。采用金氏Q值、改良的等高線法以及中效法對(duì)結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)，可以得出，三種方法的評(píng)價(jià)結(jié)果趨勢(shì)相同，隨著劑量增加，合用效果由相加轉(zhuǎn)為拮抗，但在不同效應(yīng)點(diǎn)下卻有出入，改良等高線法和中效法在有效劑量范圍內(nèi)始終表現(xiàn)為相加作用。 3.2體外研究甘草皂苷、桔梗皂苷以及兩者合用皆能抑制LPS刺激的RAW264.7細(xì)胞產(chǎn)生NO，提示為兩者抗炎機(jī)制之一。因桔梗皂苷抑制作用無(wú)規(guī)律量效關(guān)系可循，所以采用“點(diǎn)對(duì)線”研究思路，

5、固定桔梗皂苷劑量，與不同劑量甘草皂苷合用。金氏Q值法評(píng)價(jià)結(jié)果顯示為，隨著劑量增加，從協(xié)同轉(zhuǎn)入相加。 為闡明甘草皂苷和桔梗皂苷可能的抗炎機(jī)制，我們建立了一種準(zhǔn)確、價(jià)廉、可操作性強(qiáng)的體外PLA2抑制劑篩選方法。甘草皂苷、桔梗皂苷以及合用皆可從體外抑制PLA2活性，并顯示出劑量依賴(lài)關(guān)系，由于桔梗皂苷線性范圍狹窄，我們還獲取了桔梗皂苷精制物的量效曲線。金氏Q值法、改良的等高線法評(píng)價(jià)無(wú)固定配比的甘草皂苷與桔梗皂苷合用性質(zhì)，結(jié)果一致，表現(xiàn)為

6、協(xié)同；金氏Q值法、改良的等高線法和中效法對(duì)固定配比的甘草皂苷與桔梗皂苷精制物合用進(jìn)行評(píng)價(jià)，金氏Q值法、改良的等高線法結(jié)果皆表現(xiàn)為相加，而中效法則表現(xiàn)為，隨著效應(yīng)增加，從相加(效應(yīng)＜30％)轉(zhuǎn)入拮抗。 甘草皂苷和桔梗皂苷能夠顯著抑制LPS刺激的RAW264.7細(xì)胞產(chǎn)生PGE2，以及減少COX-2的生成，但對(duì)COX-2生成后的活性影響較小，提示，甘草皂苷與桔梗皂苷抗炎的機(jī)制與其抑制COX-2生成從而減少PGE2產(chǎn)生有關(guān)。該節(jié)采用“點(diǎn)

7、對(duì)線”思路，應(yīng)用金氏Q值法對(duì)PGE2和COX-2生成結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)，顯示，僅在500μg/ml甘草皂苷與0.5μg/ml桔梗皂苷的合用時(shí)表現(xiàn)為相加作用，其余劑量表現(xiàn)出拮抗。 結(jié)論“藥對(duì)”藥效的最大發(fā)揮與劑量有關(guān)，與配伍比例有關(guān)，與作用環(huán)節(jié)，尤其是機(jī)制環(huán)節(jié)上發(fā)生的相互作用有關(guān)。中藥復(fù)方是各藥味相互作用優(yōu)化的結(jié)果，綜合毒性拮抗、時(shí)間協(xié)同以及強(qiáng)度協(xié)同結(jié)果，為達(dá)到三方面的協(xié)調(diào)統(tǒng)一，尤其是在減少毒性的前提下，合用評(píng)價(jià)“相加”的結(jié)果揭示了配伍