流行性乙型腦炎PCR檢測方法的建立與應(yīng)用.pdf

1、目的：
　　根據(jù)Genebank收錄的流行性乙型腦炎病毒序列使用Oligo6.0軟件及NCBI Blast設(shè)計特異性引物序列；不斷優(yōu)化PCR檢測條件，采用不同反應(yīng)溫度，不同反應(yīng)時間，不同引物濃度確定最佳PCR檢測條件，建立流行性乙型腦炎病毒RT-PCR檢測方法。
　　方法：
　　以2013年6月至2013年10月間來本院就診的21例流行性乙型腦炎患者為研究對象，并且以此期間在本院進(jìn)行體檢的健康人20例為健康對照組，收集

2、所有患者和健康對照組研究對象的血液樣本。采用PCR進(jìn)行檢測，并與ELISA方法進(jìn)行比較。首先從研究對象的血液中分離流行性乙型腦炎病毒，接種BHK-21乳倉鼠腎細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，收集增殖培養(yǎng)后的病毒，根據(jù)Genebank收錄的流行性乙型腦炎病毒序列使用Oligo6.0軟件及NCBI Blast設(shè)計特異性引物序列，同時不斷優(yōu)化PCR檢測條件，采用不同反應(yīng)溫度，不同反應(yīng)時間，不同引物濃度確定最佳PCR檢測條件。對2013年6月至2014年12

3、月間來本院就診的87例疑似流行性乙型腦炎患者用RT--PCR方法進(jìn)行檢測，檢測時直接使用疑似流行性乙型腦炎患者的血清進(jìn)行檢測。并與流行性乙型腦炎腦脊液ELISA檢測方法進(jìn)行比較。檢測其準(zhǔn)確度和靈敏度。
　　結(jié)果：
　　PCR條件為50℃、60min，引物加入1μl時PCR反應(yīng)效果最佳。結(jié)果顯示，PCR檢測結(jié)果陽性率為95.2％，PCR產(chǎn)物測序表明PCR檢測準(zhǔn)確率達(dá)到100%。臨床應(yīng)用測評顯示PCR檢測的準(zhǔn)確率可以達(dá)到96.8