兒茶素類蛋白酶體抑制劑的設(shè)計(jì)合成和初步活性評價.pdf

1、大部分真核生物細(xì)胞內(nèi)的蛋白降解由泛素一蛋白酶體途徑(UPP)所調(diào)控。有文獻(xiàn)報道細(xì)胞內(nèi)超過80％的蛋白都在蛋白酶體降解，這其中不僅包括短半壽期和長半壽期蛋白，而且包括腫瘤抑制因子、轉(zhuǎn)錄因子和細(xì)胞周期蛋白。蛋白酶體(proteasome)是一個廣泛分布于真核細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中的多亞基大分子復(fù)合物，是一種具有多種蛋白水解功能的大分子復(fù)合物，它在承擔(dān)細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)降解的泛素一蛋白酶體通路中起催化作用。蛋白酶體不僅可以催化異常蛋白質(zhì)的降解，而且在

2、許多關(guān)鍵蛋白質(zhì)的調(diào)控方面發(fā)揮著重要作用，這些蛋白質(zhì)涉及到癌癥和免疫性疾病等人類疾病的發(fā)病機(jī)制，是細(xì)胞代謝的一個重要組成部分[1]。而且，proteasome抑制劑對多種腫瘤有抑制效果[2]，如含硼酸基的三肽蛋白酶體抑制劑萬珂(Velcade)于2005年11月獲得美國FDA批準(zhǔn)上市，用于治療骨髓瘤。因此，蛋白酶體已成為一個理想的藥物開發(fā)的靶點(diǎn)，應(yīng)用蛋白酶體抑制劑改變其酶切位點(diǎn)活性已成為目前抗腫瘤研究的熱點(diǎn)。 分子生物學(xué)研究發(fā)現(xiàn)表

3、沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)對蛋白酶體(proteasome)有很強(qiáng)的抑制活性，體外活性IC50=86nM，體內(nèi)活性18μM。EGCG是茶葉中最主要的活性成分。然而，作為先導(dǎo)化合物EGCG眾多的酚羥基導(dǎo)致化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定，極易氧化變質(zhì)；其極性過大不利穿透細(xì)胞膜，生物利用度降低。小鼠口服56 mg EGCG，僅能吸收0.012％。EGCG在堿性或中性環(huán)境中不穩(wěn)定性，所以EGCG在人體內(nèi)不穩(wěn)定，生物利用度降低。為了提高EGCG的穩(wěn)定性，

4、用氟代苯甲酸替換沒食子酸，設(shè)計(jì)和半合成了16個全新的EGCG類似物，減少了分子中易被氧化的酚羥基的數(shù)目，同時合成了6個EGCG甲基化衍生物。初步活性測試顯示，其中4個G環(huán)氟取代的化合物5，6，7，8對proteasome抑制活性稍強(qiáng)于EGCG;全乙?；暮鶨GCG類似物(5b，6b，7b，8b)對白血病Jurkat T細(xì)胞抑制活性明顯高于全乙酰化的EGCG。 本論文共半合成了30個全新化合物，包括22個目標(biāo)化合物，目標(biāo)化合物及

5、部分重要中間化合物的結(jié)構(gòu)都經(jīng)過核磁共振氫譜和質(zhì)譜驗(yàn)證。 本論文的具體內(nèi)容包括：第一在實(shí)驗(yàn)室已建立的對茶多酚粗提物衍生化再提取的方法基礎(chǔ)上，以較理想的收率和較簡便的操作方法，得到了純的中間體即芐基保護(hù)的EGC(Bn-EGC)、甲氧基保護(hù)的EGC(Me-EGC)，這些是合成EGCG類似物的最關(guān)鍵中間體；利用半合成方法合成EGCG類似物。第二，HPLC跟蹤乙酰化EGCG水解過程，確定水解時間，有效地避免了EGCG多種副反應(yīng)的發(fā)生，優(yōu)化