6種金屬合金對(duì)于L929細(xì)胞細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及Bcl-2和Bax mRNA表達(dá)的影響.pdf

1、目的：金屬合金作為口腔修復(fù)材料應(yīng)用于人體內(nèi)在人體生理環(huán)境中使用對(duì)生命有機(jī)體會(huì)產(chǎn)生一定的作用和影響。生物相容性評(píng)價(jià)是研究醫(yī)用金屬材料的重要內(nèi)容之一。本研究從細(xì)胞生物學(xué)及分子生物學(xué)角度對(duì)6種金屬合金的生物相容性進(jìn)行評(píng)價(jià)：1．本研究主要通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)來(lái)了解金屬合金對(duì)于L929細(xì)胞的細(xì)胞周期及凋亡方面的影響進(jìn)而評(píng)價(jià)其生物相容性。2．通過(guò)RT-PCR檢測(cè)Bcl-2和Bax mRNA表達(dá)探討金屬合金引起細(xì)胞凋亡的機(jī)制，同時(shí)為提出生物相

2、容性評(píng)價(jià)的新指標(biāo)提供理論依據(jù)。 材料與方法: 1、細(xì)胞培養(yǎng) L929細(xì)胞用含10％胎牛血清的RPMI 1640細(xì)胞培養(yǎng)基在37℃、5％CO<,2>的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)并傳代。 2、流式細(xì)胞儀測(cè)細(xì)胞周期 將6種金屬合金浸提液及陰性對(duì)照與L929細(xì)胞培養(yǎng)24、48小時(shí)后進(jìn)行PI染色，并通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞周期的改變。 3、凋亡細(xì)胞熒光檢測(cè) 將L929細(xì)胞接種于6孔培養(yǎng)板中并用金屬

3、合金浸提液培養(yǎng)48小時(shí)，經(jīng)Annexin V-EGFP及PI染色進(jìn)行雙染后于熒光顯微鏡下觀察凋亡細(xì)胞。 4、流式細(xì)胞儀測(cè)細(xì)胞凋亡 將6種金屬合金浸提液及陰性對(duì)照與L929細(xì)胞培養(yǎng)24、48小時(shí)后進(jìn)行Annexin V-EGFP及PI染色，并通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡。 5、RT-PCR 將6種金屬合金浸提液及陰性對(duì)照與L929細(xì)胞培養(yǎng)48小時(shí)，用RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞Bcl-2和Bax的mRNA表達(dá)。

4、 結(jié)果： 1、金屬合金對(duì)于L929細(xì)胞細(xì)胞周期的影響培養(yǎng)48小時(shí)后各組細(xì)胞表現(xiàn)出不同的增殖趨勢(shì)，其中金合金組和陰性對(duì)照組G2期比例最高，其它各組依次為鈷鉻合金組>2號(hào)鋼組>銀鈀合金組>鎳鉻合金組>3號(hào)鋼組。 2、金屬合金對(duì)于L929細(xì)胞凋亡的影響實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞經(jīng)Annexin V-EGFP和PI染色，經(jīng)熒光顯微鏡觀察可見凋亡細(xì)胞。流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果表明各組間細(xì)胞凋亡率不同。其中金合金組細(xì)胞凋亡率最低并且接近與陰性對(duì)照組，其

5、它金屬合金凋亡率遠(yuǎn)高于金合金其中鎳鉻合金引起的凋亡率最高且遠(yuǎn)高于陰性對(duì)照組，其順序?yàn)榻鸷辖?鈷鉻合金<2號(hào)鋼<3號(hào)鋼<銀鈀合金<鎳鉻合金。 3、金屬合金對(duì)L929細(xì)胞Bcl-2和Bax mRNA的表達(dá)的影響各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞Bcl-2和Bax mRNA的表達(dá)不同。Bcl-2/Bax的比值由高到低依次為：陰性對(duì)照組>金合金組>鈷鉻合金組>2號(hào)鋼組>鎳鉻合金組>銀鈀合金組>3號(hào)鋼組。 結(jié)論: 1、金屬合金可能引起L929細(xì)