殺蟲劑啶蟲脒的高效降解微生物篩選及代謝研究.pdf

1、啶蟲脒（acetamiprid）是日本曹達公司發(fā)現(xiàn)并開發(fā)的一種氯代煙堿類殺蟲劑。該殺蟲劑殺蟲譜廣，活性高、用量少、持效長而且速效。它對害蟲具有觸殺和胃毒作用，并具有卓越的內(nèi)吸活性。由于啶蟲脒的作用機理與目前常用殺蟲劑不同，所以對有機磷類、氨基甲酸酯類及合成擬除蟲菊酯類具有嚴重抗性的害蟲有特效，是世界范圍內(nèi)廣泛使用的有機磷殺蟲劑的理想替代品。隨著對該殺蟲劑研究的不斷展開，該殺蟲劑的毒性日益顯現(xiàn)。啶蟲脒低濃度下會影響蜜蜂對刺激的靈敏度以及損

2、傷蜜蜂的長期記憶；體外實驗中啶蟲脒顯示出對人體外周血淋巴細胞的基因毒性以及細胞毒性。因而有必要掌握啶蟲脒在環(huán)境中殘留的處理方法，減少其對環(huán)境的潛在危害?，F(xiàn)階段對于啶蟲脒的代謝研究，報道較多的是動植物體內(nèi)及環(huán)境中，關(guān)于微生物代謝啶蟲脒的報道還很少。本課題研究目的是篩選高效降解啶蟲脒的微生物，以期將啶蟲脒降解為對環(huán)境無毒害作用的物質(zhì)，同時，對啶蟲脒代謝產(chǎn)物進行研究，探究啶蟲脒的微生物代謝途徑。
　　本研究建立了一種篩選高效降解啶蟲脒微

3、生物的實驗方法，對篩選出的高效降解菌株進行了鑒定，對該菌的降解活力進行了研究。確定了啶蟲脒降解產(chǎn)物的分子式及分子結(jié)構(gòu)，對該菌株降解啶蟲脒的條件進行了優(yōu)化。
　　實驗建立了使用薄層層析（TLC）定性檢測及高效液相色譜（HPLC）定量檢測啶蟲脒的檢測方法，使用TLC對啶蟲脒進行定性檢測，可用于篩菌實驗初期對培養(yǎng)基中啶蟲脒濃度變化做出快速檢測；而使用HPLC的定量檢測方法，可用于對已篩選出微生物的降解能力進行衡量。
　　對于菌株的

4、鑒定，實驗從培養(yǎng)基中菌落形態(tài)、顯微鏡下微觀形態(tài)、16S rDNA基因序列分析、全細胞脂肪酸分析幾方面綜合進行。最終確定該菌為一株革蘭氏陰性菌，具有極生鞭毛，菌體為短桿狀，長約1μm，寬約0.5μm，為寡養(yǎng)單胞菌屬的一種。
　　使用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS）檢測儀，對啶蟲脒降解產(chǎn)物進行了研究，結(jié)合核磁共振檢測結(jié)果，最終確定了降解產(chǎn)物分子量為156 Da，分子式為Cl-C5H3N-CH2-NH-CH3。該物質(zhì)與已有報道的啶蟲脒在