NF-κB p65反義寡核苷酸誘導(dǎo)胃癌SGC-7901細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：采用NF—кB p65 ASODN技術(shù)特異性阻斷目的基因，探討ASODN干擾前后胃癌細(xì)胞生長增殖及凋亡、細(xì)胞形態(tài)的變化，初步研究NF-кB p65下調(diào)對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞凋亡的影響，探討誘導(dǎo)凋亡可能的機(jī)制。 方法：人工合成NF-кB p65 ASODN，通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染人胃癌細(xì)胞系SGC-7901，實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組、Lip組、ASODN+Lip組和MSODN+Lip組，核苷酸濃度為10μM.20μM、40μM。分別

2、在藥物轉(zhuǎn)染后24h、48h、72h收集細(xì)胞，采用MTT法測定NF-кB p65 ASODN對(duì)胃癌細(xì)胞增殖及凋亡的影響：流式細(xì)胞儀檢測胃癌細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞周期；光鏡觀察藥物作用后細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化：通過免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測NF-кB p65，Bel-2蛋白的表達(dá)。 結(jié)果：①M(fèi)TT 法檢測顯示：不同濃度的NF-кB p65 ASODN 均可抑制胃癌SGC-7901細(xì)胞的增殖，呈時(shí)間-劑量依賴性；②流式細(xì)胞儀檢測顯示：NF-кBp65AS

3、ODN可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，使細(xì)胞阻滯于G0/G1期，NF-кB p65 ASODN處理SGC7901細(xì)胞48 h后凋亡率為(50.51±3.35)％，錯(cuò)義寡核苷酸(MSODN)處理組為(20.34±2.11)％，兩組相比，差異有顯著性(P＜0.05)。③HE染色顯示：NF-кBp65ASODN處理SGC-7901細(xì)胞48h后，光鏡下可見細(xì)胞縮小變圓，核濃縮、核碎裂、邊聚等。④免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示：NF-кB p65 ASODN處理SGC-7

4、901細(xì)胞48小時(shí)后，NF-кB p65蛋白及Bcl-2蛋白的表達(dá)水平較對(duì)照組顯著下降(P＜0.05)。 結(jié)論：①NF-кBp65 ASODN與陽離子脂質(zhì)體形成的復(fù)合物可以成功轉(zhuǎn)染進(jìn)入SGC-7901細(xì)胞內(nèi)；②NF-кBp 65 ASODN在體外可以較明顯的抑制SGC-7901細(xì)胞的增殖、誘導(dǎo)SGC-7901細(xì)胞凋亡，作用強(qiáng)度呈劑量-時(shí)間依賴性；③NF-кBp65 ASODN可以下調(diào)NF-кBp65，Bcl-2蛋白的表達(dá)；④NF