間充質(zhì)干細胞及其培養(yǎng)上清、融凍產(chǎn)物對臍血CD34+細胞擴增及分化作用的研究.pdf

1、造血干/祖細胞移植己成為治療難治性血液病、免疫缺陷病、惡性腫瘤最有效措施之一，它包括骨髓移植(Bone marrow transplantation，BMT)、外周造血干細胞移植(Peripheral blood stem cell transplantation，PBSCT)、臍血造血干細胞移植(Umbilical cord blood transplantation，UCBT)。自1988年Gluckman等采用UCBT成功地治療了

2、1例患Fanconi貧血的5歲患兒以來，臍血移植已成為造血干細胞移植的主要方法之一，全世界已超過9000余例，其中90％以上為小兒病例。 相對骨髓及外周血造血干細胞(Hematopoietic stem cell，HSC)而言，臍血來源豐富，采集方便，攜帶巨細胞病毒和EB病毒機率低，人類白細胞抗原(humam leucocyte antigen，HLA)配型要求較低，移植時容易找到供者，且移植后移植物抗宿主病(Graft-ver

3、sus-host disease，GVHD)發(fā)生率低、嚴重程度低等優(yōu)點，已被認為是造血干細胞移植的新的干細胞來源。 UCBT。也有其自身的缺陷，因為移植物中干/祖細胞量，特別是每公斤體重有核細胞量，是受體能否重建造血及免疫的關(guān)鍵。此外移植物中免疫細胞的組成和功能也是決定移植后能否重建造血及平衡GVHD和移植物抗白血病(Graft verstlsleukemia， GVL)效應(yīng)的重要因素。臍血中有核細胞數(shù)量少，通常只及骨髓的1/1

4、0，單份臍血所含有的造血細胞量僅可以滿足體重40kg以下患者需求，對大部分成人患者來說，單份臍血有核細胞量不足，限制了其在成人患者中的應(yīng)用，且移植失敗后沒有機會再進行同一供體造血干細胞移植補救和供者淋巴細胞輸注增強GVL效應(yīng)。臍血含有比骨髓細胞更原始、更早期的造血干細胞群，且臍血T淋巴細胞較原始，抗原表達弱，移植后的GVHD發(fā)生率及嚴重程度都比骨髓及外周血要低。但近十幾年的臨床經(jīng)驗也證實，由于臍血有核細胞量少，干/祖細胞原始，高達10％

5、-20％的臍血移植未能植入，且UCBT后造血重建比骨髓移植明顯延遲，從而增加了移植失敗率、移植早期相關(guān)合并癥發(fā)生率、成份輸血頻率及時間、死亡率等。因此，如何促進UCBT的植入及加速移植后的造血及免疫重建是急需解決的關(guān)鍵問題。近年來的主要研究進展有：1、細胞因子誘導下體外擴增臍血干細胞；2、雙份臍血移植；3、臍血和間充質(zhì)干細胞(Mesenchymal stem cell，MSC)聯(lián)合移植。 UCBT植入延遲原因之一為輸注的造血干/祖細胞，

6、特別是造血祖細胞過少所致，通過體外多種造血生長因子聯(lián)合培養(yǎng)，擴增臍血造血祖細胞，將有望縮短造血重建的時問。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，采用MSCs為滋養(yǎng)層，聯(lián)合造血生長因子的擴增體系，能顯著擴增CD34+細胞的集落形成細胞(colony forming cells，CFCs)和長期培養(yǎng)起始細胞(long-term culture initiating cell，LTC-IC)，擴增產(chǎn)物進行體內(nèi)移植能加速受體造血恢復(fù)，并在受體內(nèi)長期植入。進一步的研

7、究證實，造血干細胞移植的失敗和造血恢復(fù)的延遲與放/化療預(yù)處理導致受體骨髓造血微環(huán)境的嚴重破壞密切相關(guān)。健全的骨髓造血微環(huán)境對HSC的植入及造血恢復(fù)有著極其重要的意義。MSC是骨髓造血微環(huán)境中的干細胞之一，具有高增殖、低免疫源性和多向分化的潛能。它可以通過釋放各種細胞因子，表達多種黏附分子、細胞外基質(zhì)蛋白，調(diào)節(jié)造血干細胞表面黏附分子表達，促進其粘附、歸巢等，加速造血重建。 我們的基礎(chǔ)和臨床研究證實，MSC和臍血聯(lián)合移植，明顯加速受

8、體造血重建。近年的研究還證實，MSC不但可加速造血重建，可抑制T細胞的增殖，MSC的聯(lián)合移植可減少GVHD的發(fā)生。因此，MSC與臍血HSC共移植可能是解決臍血移植后造血、免疫重建延遲有效方法之一。既往MSC的聯(lián)合移植，我們均采用活細胞輸注的方法，由于MSC培養(yǎng)時機、細胞活性保存以及是否存在致瘤性的問題，給MSC臨床應(yīng)用帶來很大的不方便。此外，到目前為止，MSC加速造血恢復(fù)及抑制GVHD的具體機制如何，尚未明確。為此，尋求MSC的有效成份