南方大口鲇和中華倒刺鲃抗菌相關蛋白的研究.pdf

1、隨著水產養(yǎng)殖業(yè)的繁榮，水環(huán)境污染加劇，魚類養(yǎng)殖頻頻發(fā)生各種疾病(細菌、病毒、寄生蟲)，制約了漁業(yè)的發(fā)展，防治過程中大量地使用的抗生素和化學藥物，對魚類品質又帶來負面影響，而且嚴重危害消費者的健康。為了提高漁業(yè)的生產能力，生產健康綠色魚類食品，研究開發(fā)魚類天然的新型的抗病藥物顯得十分必要。 生物抗菌蛋白是一類具有抗菌活性的蛋白質，廣泛存在于生物界，在機體抵抗病原菌的入侵方面起著重要的作用，被認為是缺乏特異性免疫功能生物的重要防御成

2、分。大口鲇和中華倒刺嗇巴生長快產量高，肉質細嫩，味道鮮美，消費市場廣闊，因此研究清楚大口鲇和中華倒刺鲃的抗菌蛋白和抗病機制可以給漁業(yè)帶來巨大的市場利益。 從成都通威水產科技有限公司取幾條南方大口鲇(Silurus meridionalis)和中華倒刺鲃(Spinibarbus sinensis)。 為更廣泛地研究抗菌相關蛋白，先采用三種抽提體系分別研究了健康大口鲇和患病大口鲇的皮膚分泌液和各個組織抽提樣品里抗菌因子的抗菌

3、活性及其理化性質，再研究了大口鲇和中華倒刺鲃的血清凝集素。 用抽提體系Ⅰ"0.1％TritonX-100+0.2％NaAc+1mmol/L PMSF"和抽提體系Ⅱ"0.1％TFA+50％乙孵+1mmol/L PMSF"研究了健康南方大口鲇皮膚分泌液、皮膚、胃、腸、肝臟和腎的抗菌因子，結果發(fā)現用抽提體系Ⅱ抽提得到的皮膚分泌液樣品的抗菌活性最強。它列具有廣譜的抗菌活性，對G細菌 (枯草桿菌、金黃色葡萄球菌、金黃包葡萄菌A309、糞鏈

4、球菌)和G細菌(大腸桿菌、綠膿桿菌)都有較強的抗菌活性；經胃蛋白酶在37℃下作用30min后，該抗菌因子的抗菌活性丟失；該抗菌蛋白在pH6.0和7.0時抗菌活性穩(wěn)定，pH5.0或8.0時抗菌活性減弱了一些；將其煮沸10min后離心，上清的抗菌活性依然很穩(wěn)定；采用20％～50％硫酸銨飽和度梯度對該抗菌因子進行了一定程度的純化。采用抽提體系Ⅲ"10 mmol/L HEPES+112 mmol/L NaCl+3.4 mmol/L KCI+2.

5、4 mmol/L NaHCO<,3>，pH 7.4"初步研究了一條患病大口鲇的的皮膚、腎、肝中抗菌因子的抗菌活性和蛋白質組成。因為凝集素是魚類主要的抗菌相關因子，所以著重研究了健康大口鲇和中華倒刺鲃血清中的天然凝集素。為進一步的基因研究奠定了基礎從大口鲇血清分離到一種天然的凝集素分子，能夠凝集多種不同的抗原物質。該天然凝集素不能透過半透膜，是一種大分子物質；經過蛋白酶K、胃蛋白酶、胰蛋白酶作用過后，喪失凝集活性，是一種蛋白質；用DNas

6、e、RNase和脂溶劑乙醚處理過后，其凝集活性保持不變，說明其組成與核酸和脂類物質無關。該凝集素耐熱性好，75℃條件下保溫1h活性保持不變；而且對SDS不敏感。在一定的溫度范圍內(4℃～37℃)，隨著溫度的升高該凝集素凝集能力增強。經糖的專一性抑制實驗顯示，蔗糖和半乳糖對凝集反應有抑制作用，說明這2種糖分子是凝集素在識別和凝集過程中起一定作用的糖分子。 從中華倒刺鲃血清分離到一種天然的凝集素，能夠凝集多種不同的抗原物質。該天然凝

7、集素不能透過半透膜，是一種大分子物質；經過蛋白酶K、胃蛋白酶、胰蛋白酶作用過后，喪失凝集活性，是一種蛋白質；用DNase、RNase和脂溶劑乙醚處理過后，其凝集活性保持不變，說明其組成與核酸和脂類物質無關。該凝集素耐熱性好，60℃條件下保溫1h活性保持不變；而且對SDS不敏感。在一定的溫度范圍內(4℃～37℃)，隨著溫度的升高該凝集素凝集能力增強。經糖的專一性抑制實驗顯示，蔗糖和乳糖對凝集反應有抑制作用，說明這2種糖分子是凝集素在識別和