小鼠RESP18的克隆與功能研究.pdf

1、學校代 碼 :學 號 :10 2 4 60 6 210 10 14灌*大碩 士 學 位 論 文小 鼠 R E SP 1 8 的克 隆與 功 能研 究院 系 :專 業(yè) :姓上 海 醫(yī) 學 院神 經(jīng) 生 物 學梁 敏指 導 教 師 : 黃 芳 教 授導 師 組 成 員 : 余 梅 博 士完 成 日 期 : 2009 年 5 月復 旦大 學碩 士論文摘 要RE SP 18( Re gul atedE ndoeri neSeeret oryPr

2、ot ei n， 18切 a)在 1994 年 克 隆 于大 鼠垂 體 中間葉( neuroi nterm edi atepi tui t 腳 l obes， N IL )的 eD N A 庫 。 RE SP 18m R N A 的翻 譯產 物 被認 為是 一種 和分 泌途 徑密切 相 關 的分子 量 為 18kD a 左 右 的蛋 白，該蛋 白主要 分布 于 內分 泌 組織和 神經(jīng)系統(tǒng) 。到 目前 為止 ， 對 RE SP 18 的研

3、 究 主要集中于在大 鼠和人 的組 織器 官 中的表達分 布 以及 R E SP 18 的調節(jié) 因素和 調 節(jié)途 徑 ，而對其在 神經(jīng)系統(tǒng)方面 的研 究鮮有開展 。為 了研 究 R E SP 18 在神 經(jīng)系 統(tǒng) 中的功 能 ，首先 我們從 C 57B L/6) 小 鼠腦 中克隆 了 R E SP 18cD N A ，同時發(fā)現(xiàn) 了一種 新 的 R E SP1 8 剪接體 ，并名 為 R E SP1 8一 c。既 SP 18一 c 序 列

4、 己被 N C B I 伽 ati onalC enierforB i otechn ol ogyI nform ati on， U . S. A )接受， 序列號為 FJ621497.1。 RE SP 18一 cm R N A 編 碼 的蛋 白具 有 120 個 氨 基 酸 殘 基 ，分子量 為 13. 45 kD a。利 用 R l’ -P C R 分析 小 鼠中 RE SP 18一 c 的表 達譜 ，我們 發(fā)現(xiàn)在外 周 RE SP

5、 18一 。 表達 于胰 腺 、腎上腺 、腎臟 、翠 丸 ，而肌 肉、心臟 、脾 臟 、肺 臟 、肝臟 、卵巢 、附翠 、精囊腺 中沒有表達 ; 在 神 經(jīng) 系 統(tǒng) 中，RE SP1 8一 c 分布 廣 泛 ，皮層 、海 馬 、紋狀 體 、黑質 、小腦 、腦 干和 脊 髓 等 部位都有表達 。R 衛(wèi) SP1 8一 c 與RE SP 18 的表 達模 式存在 許 多 的共性 。RE Sp 18m RN A 在 帕金 森病( p ar ki

6、 nson ’ 5D i sease， pD )相 關腦 區(qū)黑質 和 紋狀 體部位 均 有 表 達 ，已有 研 究 表 明它 的表達 受 多 巴胺 受 體 激 動 劑和 拮抗 劑 調 控 ，因此我們 研 究 了 R E SP 18 和 P D 之 間 的聯(lián) 系 。利 用 經(jīng) M PP +處理 具 有 多 巴胺 能 前 體 細胞特 性 的小 鼠 M N gD 細 胞作 為 PD 細胞 模 型 ，初 步探 討 了 尺 尺滬18 基 因在 P

7、 D 中的作用 。結果顯 示 : 在 細胞水平 上 M PP+ 可 以誘 導 RE SP 18m R N A 表達 的顯 著升高 ; 與 RE SP 18 相 關 的可調 節(jié)細 胞骨架 和神 經(jīng) 突起 生長 的蛋 白激 酶 LIM KZ (LIMdom ai nkinase 2)的表 達 也 明顯升 高 。RE SP 18 與 P D 的關系值得進 一步研 究 ?；?因敲 除技 術 是研 究基 因功 能 的有 利手段 之 一 ， R 云

8、 兮 P IS 基 因敲 除雜 合 子 小鼠交配后 ，始 終未 能得 到純合 子后代 ，推測 R E SP1 8 的完全缺 失將會 導致 胚 胎 致死 效應 。通過 鑒 定不 同發(fā)育期 的小 鼠胚胎 ，我們確 定胚胎致死 時間在 受 孕 9. 5 天之 前 ， 并且雜合 子 與野 生型胚胎 的 比例接近 2:1。RE SP1 8 在 小 鼠胚 胎 干 細胞 (ES)中沒 有 表 達 ，在 發(fā) 育 9. 5 天 的胚 胎 中 R E SP