膜聯(lián)蛋白A5在散發(fā)性大腸癌中的表達及其與大腸癌分期及預后的相關性研究.pdf

1、第二軍醫(yī)大學博士學位論文膜聯(lián)蛋白A5在散發(fā)性大腸癌中的表達及其與大腸癌分期及預后的相關性研究姓名：邢俊杰申請學位級別：博士專業(yè)：外科學（普通外科）指導教師：孟榮貴20090601第二軍醫(yī)大學博士學位論文首先，我們由正常人胎盤組織中克隆得到了膜聯(lián)蛋白A5的基因編碼區(qū)全長序列，并通過亞克隆技術將其裝載入真核表達載體pcDNA31()。我們收集了51例病例完整、背景清楚的散發(fā)性大腸癌患者組織樣本作為研究對象，同時獲得了51例非惡性腸道疾病患者

2、的組織樣本作為對照。通過免疫組織化學實驗，我們首先對腫瘤樣本中p53、Ki67這兩個腫瘤臨床診斷上較為常用的標志物進行了分析，并分別根據p53的突變情況和Ki一67增殖指數對51例腫瘤組織樣本進行了歸類。隨后我們選擇了目前功能較為清楚的膜聯(lián)蛋白A5作為切入點，借助熒光實時定量PCR和免疫組織化學等實驗手段，分別從mRNA水平和蛋白質水平上對膜聯(lián)蛋白A5在組織樣本中的表達情況進行了檢測。研究結果顯示：膜聯(lián)蛋白A5的表達水平在散發(fā)性大腸癌組

3、織中發(fā)生了上調；同時A5在腫瘤組織中的表達變化與p53的突變和Ki一67增殖指數分別呈正相關。這一結果提示我們膜聯(lián)蛋白A5與大腸癌的惡化、增殖等特征具有相關性，可能在其中起著重要的作用，并且膜聯(lián)蛋白A5能夠作為一種腫瘤標志物應用于大腸癌的臨床診斷，因此具有臨床應用價值。在此基礎上，我們擴大樣本量，選擇了176例病例完整、背景清楚的散發(fā)性大腸癌患者組織樣本作為研究對象。手術切除標本后，分別配對取其大腸癌變部位組織以及正常組織。然后通過實時

4、定量PCR和免疫組化染色的方法鑒定每個標本的膜聯(lián)蛋白A5的mRNA和蛋白表達情況。實時定量PCR結果顯示腫瘤中的膜聯(lián)蛋白A5的mRNA水平上調。免疫組化結果顯示膜聯(lián)蛋白A5在405％的腫瘤之中高表達。同時進行嚴格詳細的術后隨訪。通過統(tǒng)計數據判斷膜聯(lián)蛋白A5的表達與病理分期和預后之間的關系。我們的研究結果顯示，膜聯(lián)蛋白A5的表達情況可以作為一個有價值的分子標記物，用來預測患者外科手術切除腫瘤后的預后。無論是進行單變量分析還是多變量分析，我

5、們的研究數據都顯示，膜聯(lián)蛋白A5的表達情況和患者5年生存率的降低以及腫瘤復發(fā)率的提高都有很強的相關性。多變量分析顯示，膜聯(lián)蛋白A5的表達情況可以作為一個獨立的預測因子用來預測預后。因此，不考慮腫瘤的病理分期而僅用腫瘤組織中的膜聯(lián)蛋白A5表達水平也可以預測患者的術后預后。另外，膜聯(lián)蛋白A5表達水平也可作為術前預測治療效果的一個預測因子。我們的研究提示，膜聯(lián)蛋白A5在大腸癌的生長、進展以及轉移等過程中可能扮演了一個相當重要的角色。在組織水平