急性炎癥對黑色素瘤微血管密度及明膠酶表達與活性影響的實驗研究.pdf

1、目的:建立黑色素瘤急性炎癥小鼠模型,利用免疫組化染色與明膠酶譜技術,觀察急性炎癥對腫瘤體積、微血管密度、明膠酶表達與活性的影響,闡明急性炎癥對進展期腫瘤生長的影響,初探其分子機制。
　　 內(nèi)容:
　　 1.急性炎癥-黑色素瘤模型的建立:通過制造單純傷口與施加重復擴創(chuàng)、創(chuàng)面涂抹金黃色葡萄球菌、創(chuàng)面涂抹冰乙酸等手段,建立四種對應小鼠模型,比較優(yōu)劣,選擇合適的急性炎癥.黑色素瘤模型。
　　 2.急性炎癥對黑色素瘤體積的

2、影響:建立重復擴創(chuàng)-黑色素瘤模型,比較對照組與實驗組腫瘤體積的變化。
　　 3.急性炎癥對微血管密度的影響:建立小鼠黑色素瘤.重復擴創(chuàng)模型,通過HE巳染色比較對照組與實驗組微血管密度,明確內(nèi)皮依賴性血管在炎癥環(huán)境中的變化。
　　 4.急性炎癥對黑色素瘤明膠酶表達及活性的影響:通過免疫組化染色比較對照組與實驗組明膠酶的表達情況,明膠酶譜分析對照組與實驗組明膠酶的活性。
　　 方法:
　　 1.在荷瘤鼠上分別

3、建立單純創(chuàng)傷模型,重復擴創(chuàng)模型,創(chuàng)傷+化膿菌模型,創(chuàng)傷+冰乙酸模型。
　　 2.每日觀察創(chuàng)面情況,記錄腫瘤長短徑,計算腫瘤體積,繪制腫瘤生長曲線,比較不同模型對腫瘤生長的影響。
　　 3.根據(jù)預實驗結果,建立重復擴創(chuàng)-黑色素瘤模型。
　　 4.每日觀察創(chuàng)面情況,記錄腫瘤長短徑,繪制腫瘤生長曲線,建立急性炎癥模型第5天處死所有小鼠。
　　 5.利用公式計算各組腫瘤不同觀測點時的體積,并進行比較6.HE染色,

4、高倍光鏡下辨認微血管,按Weidner法計數(shù)腫瘤組織樣本中微血管數(shù)。
　　 7.免疫組化標記明膠酶陽性細胞,免疫反應積分法分析腫瘤組織樣本中明膠酶的表達水平。明膠酶譜分析腫瘤組織樣本中明膠酶活性。
　　 結果:
　　 1.不同急性炎癥黑色素瘤模型的效果:重復擴創(chuàng)-黑色素瘤模型,創(chuàng)傷+化膿菌-黑色素瘤模型,創(chuàng)傷+冰乙酸-黑色素瘤模型中腫瘤生長被抑制。單純創(chuàng)傷-黑色素瘤模型對腫瘤生長幾乎無影響。本研究小組選擇重復擴創(chuàng)

5、-黑色素瘤模型作為下階段實驗動物模型2.急性炎癥對黑色素瘤腫瘤體積的影響:實驗組腫瘤體積增長速度慢于對照組。
　　 3.急性炎癥對黑色素瘤內(nèi)皮依賴性血管的影響:對照組MVD為23.240±2.289,實驗組為16.560±1.325,實驗組內(nèi)皮依賴性血管少于對照組,差異有統(tǒng)計學意義。
　　 4.急性炎癥對黑色素瘤明膠酶表達及活性的影響:實驗組明膠酶表達及活性低于對照組,差異有統(tǒng)計學意義。
　　 結論:
　　

6、 1.建立了單純創(chuàng)傷-黑色素瘤,重復擴創(chuàng)-黑色素瘤,創(chuàng)傷+化膿菌-黑色素瘤,創(chuàng)傷+冰乙酸-黑色素瘤四種急性炎癥-腫瘤復合模型。結果表明,單純創(chuàng)傷-黑色素瘤模型對腫瘤生長無影響,后三者均可抑制腫瘤生長且對腫瘤生長抑制程度相同,說明一過性炎癥對腫瘤生長不產(chǎn)生影響,只有達到一定的強度并持續(xù)一定時間,方可抑制腫瘤的生長。
　　 2.本研究建立的三種有效抑制腫瘤生長的動物模型,在創(chuàng)面愈合情況、操作技術水平和實驗室條件和管理的要求等方面各