雌激素受體α及其變異體在HBV相關肝病中的表達及意義.pdf

1、乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染是一個嚴重公共衛(wèi)生問題,對人類健康造成了極大的威脅。我國是原發(fā)性肝癌的高發(fā)國家,與歐洲國家引起肝癌的主要危險因素不同,我國原發(fā)性肝癌主要是由慢性HBV感染引起,HCC患者中約70％以上有HBV感染。同時,在HBV慢性感染者當中,重型乙型肝炎、肝硬化、肝癌的發(fā)病率呈現顯著的性別差異,男女性別比約5-10:1。男性重型肝炎、肝硬化、肝癌患者的預后較差、死亡率較高,女性肝癌患者無論

2、是自然生存率還是切除術后生存率均高于男性。造成肝癌性別差異的因素一直以來被認為是揭示肝癌發(fā)病機制的關鍵。流行病學和實驗證據表明,除了經典的乳腺癌和前列腺癌之外,肝癌也是性激素影響極其顯著的腫瘤之一。
　　大量的研究提示,雌激素與肝癌的發(fā)生發(fā)展有關。雌激素是通過與特異性的受體(雌激素受體)相結合而發(fā)揮作用的,雌激素受體(estrogen receptor,ER)主要有α和β兩種亞型。我們前期研究發(fā)現ERα基因的29C-IVS1-40

3、1C單倍型不僅能夠增加HBV感染清除還能降低HBV相關的肝硬化、肝癌的易感性,提示ERα與HBV感染疾病的進程有關。2012年臺灣學者 Wang等研究發(fā)現,ERα可以通過與肝細胞核因子-4α(hepatocyte nuclear factor-4α,HNF-4α)交互作用來抑制HBV基因的轉錄,進一步解釋了HBV相關HCC男性多于女性的原因。
　　1998年Villa等首次報道:ERα第5外顯子缺失而產生的變異體(ERαδ5)在H

4、CC中也有表達,且ERαδ5的表達與肝癌患者的預后相關。國內關于這方面的研究較少,特別是ERαδ5蛋白在HCC組織中的表達情況目前尚無報道。因此,本研究擬采用免疫組織化學、RT-PCR及Western blot的方法來檢測HBV相關肝病患者肝組織中ERα及其變異體的mRNA和蛋白的表達及規(guī)律,以探討ERα及變異體在HBV相關肝病發(fā)生發(fā)展中的作用,以望對HBV相關肝病的內分泌治療及預后判斷提供依據。
　　本研究分為三部分:第一部分以

5、HBV相關HCC為研究對象,采用免疫組化及Western blot的方法研究野生型ERα和ERβ在HBV相關HCC組織中的表達及規(guī)律,并分析ERα、ERβ的表達與HCC患者臨床病理特征的關系。第二部分以HBV相關HCC、癌旁及慢性乙型肝炎為研究對象,采用RT-PCR、TA克隆測序的方法研究ERα及變異體在HBV相關HCC、癌旁及慢性乙型肝炎中的表達及規(guī)律,并確定變異體類型。第三部分在第二部分確定變異體類型的基礎上,制作變異體特異性抗體,

6、并以HBV相關肝癌、癌旁及慢性乙型肝炎為研究對象,采用組織芯片免疫組化及Western blot的方法研究變異體ERαδ5在HBV相關肝癌、癌旁及慢性乙型肝炎中的表達規(guī)律,并分析ERαδ5的表達與HBV相關HCC患者臨床病理特征的關系。
　　結果:
　　1.ERα在HBV相關肝癌肝組織中主要表達定位于細胞漿,陽性表達率為35.7%。在腫瘤直徑≤5cm和TNM分期中Ⅰ~Ⅱ期患者的ERα表達明顯高于腫瘤直徑>5cm和TNM分期Ⅲ

7、~Ⅳ期的患者(P值分別為0.006和0.011),其表達與患者性別、年齡、血清中AFP水平、腫瘤分化程度及腫瘤結節(jié)多少差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　2.ERβ在HBV相關肝癌肝組織中主要表達定位于細胞漿,其表達與患者性別、年齡、腫瘤大小、TNM分期、腫瘤分化程度、結節(jié)多少及血清AFP水平差異均無統(tǒng)計學意義。
　　3.野生型ERαmRNA在乙肝相關肝癌、癌旁及慢性乙型肝炎肝組織中的表達率分別為100%、88.2%和7

8、7.8%,差異無統(tǒng)計學意義。
　　4.在乙肝相關肝癌、癌旁及慢性乙型肝炎肝組織中有ERα第五外顯子缺失變異體ERαδ5mRNA的表達,其表達率分別為76.5%、76.5%和38.9%,差異有統(tǒng)計學意義(χ2=7.169,P=0.025)。
　　5.組織芯片免疫組化提示ERαδ5在肝癌、癌旁及正常肝組織中均定位于細胞漿,陽性表達率分別為67.2%、50%和25%,差異具有統(tǒng)計學意義(χ2=7.308,P=0.026)。

9、　　6.Western blot檢測發(fā)現ERαδ5蛋白在肝癌、癌旁及慢性乙型肝炎組織陽性表達率分別為88.2%、76.5%和61.1%,差異無統(tǒng)計學意義(χ2=3.460,P=0.177)。
　　結論:
　　1.ERα和ERβ在慢性乙型肝炎、乙肝相關肝癌及癌旁組織中均有表達,且主要定位于細胞漿。
　　2.ERα在HBV相關HCC中存在差異表達,在腫瘤直徑≤5cm和TNM分期中Ⅰ~Ⅱ期患者的ERα表達明顯高于腫瘤直徑>5