來氟米特對高糖誘導的足細胞裂孔隔膜及細胞骨架影響及機制研究.pdf

1、目的:
　　 1.通過建立體外高糖刺激的足細胞模型，檢測足細胞NF-κ B、TRPC6、nephrin、F-actin的表達情況及A771726干預的影響并探討其可能的作用機制。
　　 2.初步探討A771726對體外高糖培養(yǎng)足細胞保護作用及可能的作用機制。
　　 方法:
　　 條件永生的人腎小球足細胞株分為正常糖組、甘露醇高滲對照組、高糖刺激組、高糖+PDTC（pyrrolidine dithiocar

2、bamate為NF-κ B通路特異性抑制劑）組及高糖+A771726（來氟米特活性代謝產物）組。
　　 用Western印跡法測定足細胞NF-κ Bp65途徑的活化即p-NF-κ Bp65/ NF-κ Bp65比值，Western印跡法、半定量RT-PCR測定NF-κ Bp65、TRPC6、nephrin在腎小球足細胞的表達。免疫熒光染色法檢測足細胞骨架的變化。
　　 結果:
　　 1.高糖刺激足細胞激活NF-κ

3、Bp65信號通路，60min時p-NF-κ Bp65蛋白表達與0min比顯著增加（1.20±0.04比0.79±0.02，P＜0.01）;正常糖組和高滲對照組僅有少量NF-κ Bp65活化;PDTC及A771726可明顯抑制p-NF-κ Bp65表達(P＜0.05)，NF-κ Bp65 mRNA表達各組之間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 2.高糖刺激足細胞激活NF-κ Bp65信號通路后，TRPC6 mRNA及蛋白表達

4、較正常組高，nephrin mRNA及蛋白表達較正常組降低;PDTC及A771726可抑制TRPC6高表達，使nephrin表達較高糖組增多（均P＜0.05）。
　　 3.免疫熒光法檢測高糖刺激足細胞72h后可見細胞骨架蛋白微絲肌動蛋白(F-actin)紊亂及張力纖維消失。
　　 結論:
　　 來氟米特活性代謝產物A771726可通過阻斷高糖誘導的NF-κ Bp65信號通路的活化對足細胞起保護作用。