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文檔簡介
1、骨折發(fā)生后,局部注射神經(jīng)生長因子可以促進(jìn)骨折的愈合。甘油二酯激酶(DGK)是細(xì)胞內(nèi)重要的第二信使,參與了多種細(xì)胞的生理和病理過程。本研究通過建立大鼠骨折模型,檢測DGKα和蛋白激酶C(PKC)在不同病理階段的腦干和小腦的蛋白表達(dá)、細(xì)胞定位和分布變化,探討DGKα在大鼠骨折愈合病理過程中加速骨折愈合的機(jī)制。
本研究應(yīng)用SD大鼠制成骨折模型,并設(shè)置假手術(shù)的正常SD大鼠做對照,根據(jù)骨折愈合分期方法與SD大鼠骨折局部組織學(xué)變化,將大鼠
2、骨折愈合過程分為三期:早期即術(shù)后1-3d;中期即術(shù)后4-14d;后期即術(shù)后15d之后。分別于術(shù)后第3,7,14,24,42d各處死1只對照組和5只模型組大鼠。用半定量RT-PCR檢測腦干和小腦DGKα和PKC mRNA的表達(dá)變化,用免疫組織化學(xué)染色和免疫熒光雙標(biāo)法檢測骨折愈合過程中DGKα和PKC的細(xì)胞定位和蛋白的分布變化。
結(jié)果顯示:在早期和中期模型組大鼠腦干和小腦內(nèi)病理改變以炎性浸潤為主,神經(jīng)元在骨折三期均未發(fā)生明顯的形態(tài)
3、學(xué)改變。模型組術(shù)后3,7,14d,腦干中DGKα和PKC mRNA的表達(dá)水平高于對照組(P<0.05)。模型組術(shù)后3,7,14,24d,小腦中DGKα mRNA的表達(dá)高于對照組水平(P<0.05),PKC mRNA在模型組和對照組的表達(dá)變化無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示,在各骨折天數(shù)模犁組和對照組的腦干中,纖維狀結(jié)構(gòu)均呈DGKα反應(yīng)陽性,在對照組腦干中未見DGKα陽性細(xì)胞出現(xiàn),模型組術(shù)后3d的腦干內(nèi)即出現(xiàn)DG
4、Kα陽性細(xì)胞,陽性反應(yīng)位于細(xì)胞核周的胞漿內(nèi),至術(shù)后7d和14d,陽性反應(yīng)的部位移至整個胞漿內(nèi),至模型組術(shù)后24d和42d,細(xì)胞均呈DGKα反應(yīng)陰性。免疫熒光雙標(biāo)法顯示,腦干內(nèi)的DGKα陽性細(xì)胞為神經(jīng)元。在各骨折天數(shù)對照組和模型組的腦干中,纖維狀結(jié)構(gòu)均呈PKC反應(yīng)陽性。對照組未見PKC陽性細(xì)胞出現(xiàn),在模型組,PKC陽性細(xì)胞出現(xiàn)于術(shù)后3d和7d,陽性反應(yīng)位于胞漿,至術(shù)后14,24,42d,細(xì)胞呈PKC反應(yīng)陰性。免疫熒光雙標(biāo)結(jié)果顯示,腦干內(nèi)可
5、見DGKα、PKC雙陽性神經(jīng)元。在對照組和模型組的小腦中,纖維狀結(jié)構(gòu)均呈DGKα陽性反應(yīng)。DGKα陽性梨狀神經(jīng)元僅見于模型組術(shù)后3,7,14,24d,陽性反應(yīng)位于胞漿。在對照組和模型組術(shù)后42d,均未見DGKα陽性梨狀神經(jīng)元出現(xiàn)。在對照組和模型組的小腦中,僅纖維狀結(jié)構(gòu)呈PKC反應(yīng)陽性,未見PKC陽性梨狀神經(jīng)元出現(xiàn)。
綜上所述:骨折愈合過程中,腦干和小腦中DGKα和PKC有著不同的表達(dá)和分布。DGKα mRNA在骨折早期和中期的
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