維甲酸聯(lián)合低濃度化療藥物對肺腺癌A549細(xì)胞的作用及機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　 觀察全反式維甲酸和不同劑量的化療藥物吉西他濱、順鉑聯(lián)合處理A549人肺腺癌細(xì)胞株,以了解不同藥物、不同劑量及不同作用時間對A549細(xì)胞增殖影響及其可能機(jī)制。
　　 方法：
　　 用MTT法測定:全反式維甲酸作用于A549細(xì)胞最適宜濃度;全反式維甲酸和化療藥物最適宜的聯(lián)合用藥時序關(guān)系;全反式維甲酸單藥組、化療藥物單藥組以及維甲酸和化療藥物聯(lián)合用藥組分別作用于A549細(xì)胞相對于對照組細(xì)胞增殖抑制率的變化

2、。運(yùn)用westernblot方法檢測維甲酸單藥組、化療藥物單藥組以及維甲酸和化療藥物聯(lián)合用藥組p-ERK,RRM1,P-糖蛋白的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：
　　 MTT結(jié)果顯示,以不同濃度ATRA作用于A549細(xì)胞,隨著ATRA濃度的上升,在ATRA濃度小于20μmol/L時對于A549細(xì)胞的抑制作用也有一個明顯的提升(P＜0.01),但當(dāng)ATRA濃度大于20pmol/L以后各組抑制率差別不大(P＞1)。而ATRA和順鉑以

3、不同的先后順序處理A549細(xì)胞顯示了不同的抑制效果,當(dāng)順鉑作用后4h和順鉑作用后12h再加入ATRA聯(lián)合作用后A549細(xì)胞的抑制率和其他時間點(diǎn)比較有顯著差異(P＜0.01),但兩組之間差異并不明顯(P＞1)?？梢哉J(rèn)定該兩組化療藥物作用后4h和化療無作用后12h再加入ATRA聯(lián)合作用A549細(xì)胞均可達(dá)到最佳的抑制效果。各實(shí)驗(yàn)組藥物處理A549細(xì)胞24h后MTT結(jié)果顯示,吉西他濱濃度在2.0mg/L、4.1mg/L時維甲酸的增效作用并不明顯

4、,進(jìn)一步加大濃度可見抑制率上升明顯。在同等吉西他濱藥物濃度情況下,聯(lián)合全反式維甲酸可見A549細(xì)胞增殖抑制率明顯上升。而維甲酸聯(lián)合每一個順鉑濃度組在抑制率的比較上都有一定程度的提升。同樣,在同等順鉑藥物濃度情況下,聯(lián)合全反式維甲酸可見A549細(xì)胞細(xì)胞增殖抑制率明顯上升。Westernblot結(jié)果顯示各個藥物處理組處理A549細(xì)胞24h后,除RRM1蛋白表達(dá)均較低外各表達(dá)條帶均可見明顯差別,p-ERK的表達(dá)在維甲酸單藥組、化療單藥組和對照

5、組差別不明顯,但聯(lián)合用藥組可明顯見到條帶減弱,P-糖蛋白雖然各組表達(dá)都較弱,但仍可以看出在化療單藥組和對照組中差別不明顯,而加入ATRA的處理組P-糖蛋白表達(dá)減進(jìn)一步減弱。
　　 結(jié)論：
　　 全反式維甲酸和各濃度的順鉑、吉西他濱聯(lián)合用藥可以在達(dá)到同等抑制效果的情況下減少順鉑及吉西他濱所需要的濃度。全反式維甲酸可通過抑制ERK-MAPK通路,間接或直接抑制RRM1和P-糖蛋白的表達(dá),從而在增加化療敏感性的同時降低化療耐藥