骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在大鼠離體肝切除自體肝移植中肝功能保護(hù)作用的觀察及機(jī)制初步研究.pdf

1、研究背景: 離體肝切除自體肝移植術(shù)是基于肝移植技術(shù)治療肝臟特殊部位腫瘤的一種手術(shù)方式，因手術(shù)難度大，全球至今開展不多，更無(wú)相關(guān)基礎(chǔ)研究。西南醫(yī)院肝膽外科開展該類手術(shù)多年，手術(shù)例數(shù)已累計(jì)38例，其與肝移植術(shù)最大不同之處是在有肝硬化為基礎(chǔ)病變下進(jìn)行超長(zhǎng)時(shí)間、難度大、復(fù)雜手術(shù)。故術(shù)后如何減少肝功能不全成為首先關(guān)注的問題。研究已證實(shí)，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)能改善肝硬化患者肝功，其在改善離體肝切除自體肝移植術(shù)后肝功能有較好的前景。

2、　　 研究目的及理論意義: 創(chuàng)建了離體肝切除自體肝移植手術(shù)動(dòng)物模型，為相關(guān)基礎(chǔ)研究提供平臺(tái)。通過模型大鼠經(jīng)門靜脈移植BMSCs入肝后，動(dòng)態(tài)觀察BMSCs在肝臟分布情況，檢測(cè)術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)肝功能、肝細(xì)胞凋亡情況和凋亡相關(guān)蛋白，明確BMSCs是否對(duì)離體肝切除自體肝移植術(shù)后大鼠具有肝功能保護(hù)作用，并初步探討可能的機(jī)制，為臨床上離體肝切除自體肝移植聯(lián)合BMSCs移植治療提供參考價(jià)值，并為藥物分子靶向治療提供參考。
　　 研究方法: (

3、1)培養(yǎng)SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)并進(jìn)行鑒定。(2)采用四氯化碳注射法建立SD大鼠肝纖維化模型。(3)建立SD大鼠離體肝切除自體肝移植動(dòng)物模型，分別取正常組SD大鼠與輕度肝纖維化SD大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，根據(jù)是否移植BMSCs，各將大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(n=30)，BMSCs移植組(n=30)和對(duì)照組(n=30)。(4)分別于大鼠離體肝切除自體肝移植術(shù)后或假手術(shù)組術(shù)后12h、24h、48h、72h、168h時(shí)間點(diǎn)處死各組大鼠，觀察大

4、鼠術(shù)后早期存活率，檢測(cè)大鼠肝功指標(biāo)；在正常大鼠中，觀察BMSCs在肝臟動(dòng)態(tài)分布情況，采用TUNEL法檢測(cè)各組間不同時(shí)間點(diǎn)的肝細(xì)胞凋亡情況，采用wb法檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白TGF-β1、bcl-2、bax在術(shù)后24h、72h、168h的相對(duì)表達(dá)情況；在輕度纖維化大鼠中，采用wb法檢測(cè)了凋亡相關(guān)蛋白TGF-β1、TGF-β R1、TGF-β R2、bcl-2、bax、p38、p-p38表達(dá)情況。
　　 結(jié)果: 成功建立肝纖維化大鼠模型和離

5、體肝切除自體肝移植動(dòng)物模型，順利培養(yǎng)大鼠BMSCs并鑒定。在正常SD大鼠中，BMSCs移植組術(shù)后大鼠死亡率低于對(duì)照組，術(shù)后移植BMSCs的大鼠肝組織中均有GFP表達(dá)，并隨時(shí)間推移表達(dá)增多，BMSCs移植組術(shù)后12h、24h、48h、72h時(shí)間點(diǎn)ALT、AST等肝功指標(biāo)明顯好于對(duì)照組，肝細(xì)胞凋亡率低于對(duì)照組(p<0.05)，BMSCs移植組TGF-β1、bax水平較對(duì)照組減少，bcl-2較對(duì)照組增高，其中在術(shù)后24h、72h時(shí)間點(diǎn)bax下

6、調(diào)、bcl-2上調(diào)有顯著性差異(p<0.05)，而TGF-β1在24、72 h無(wú)顯著性差異。在肝纖維化SD大鼠中，BMSCs移植組術(shù)后12h、24h、48h、72h ALT、AST等肝功能指標(biāo)明顯好于對(duì)照組(p<0.05)，對(duì)該組進(jìn)一步檢測(cè)發(fā)現(xiàn)BMSCs移植組TGF-β1、TGF-β R1、p38、p-p38、bax在12h、24h、48h、72h時(shí)間點(diǎn)較對(duì)照組顯著下降(p<0.05)，而bcl-2在12h、24h、48h、72h時(shí)間點(diǎn)

7、明顯升高(p<0.05)。
　　 結(jié)論: 首次創(chuàng)建了纖維化大鼠離體肝切除自體肝移植術(shù)的動(dòng)物模型，為基礎(chǔ)研究提供研究平臺(tái)。BMSCs術(shù)中移植入肝能改善離體肝切除自體肝移植大鼠術(shù)后肝功能，提高術(shù)后大鼠存活率，為臨床上離體肝切除自體肝移植聯(lián)合BMSCs移植治療提供動(dòng)物實(shí)驗(yàn)參考。其可能通過影響bcl-2/bax值來減少肝細(xì)胞凋亡而改善肝功能，可能是通過TGF-β1/TGF-β R1、P38等相關(guān)的途徑完成的，為分子靶向治療及后續(xù)研究提供