重組乙酰膽堿受體_亞單位-BirA識別多肽序列基因的構建與表達.pdf

1、分類號密級UDC學號200602022延邊大學碩士學位論文重組乙酰膽堿受體重組乙酰膽堿受體?亞單位亞單位BirA識別多肽序列基因的構建與表達別多肽序列基因的構建與表達ConstructionExpressionofRecombinantAcetylcholineReceptαSubunitBirARecognitionPolypeptideSequenceGene研究生姓名陳秋艷培養(yǎng)單位基礎醫(yī)學院指導教師姓名、職稱孟繁平教授學科專業(yè)病原

2、生物學研究方向自身免疫性疾病論文提交日期2009年4月5日延邊大學病原生物學專業(yè)碩士學位論文中文摘要1重組乙酰膽堿受體重組乙酰膽堿受體?亞單位亞單位BirABirA識別多肽序識別多肽序列基因列基因的構建與表達的構建與表達摘要目的：目的：構建重組乙酰膽堿受體?亞單位BirA識別多肽序列基因（pcDNA3.1AChRαBirA）并對其進行真核基因表達。方法：方法：設計引物生物素蛋白連接酶（BirA）識別多肽序列基因。將載體pcDNA3.1A

3、ChRα經限制性核酸內切酶Ecⅴ單酶切后，用低熔點瓊脂糖凝膠電泳回收并純化，與BirA識別多肽序列基因連接。將連接產物轉化至感受態(tài)細胞E.coliDH5α并擴增，再用Ecⅴ單酶切檢查BirA識別多肽序列基因插入的正確性，并測序驗證，然后將構建成功的載體在中國倉鼠卵巢細胞（CHO）表達。表達產物以綠色熒光標記，經激光掃描共聚焦顯微鏡驗證。結果：結果：電泳檢查發(fā)現(xiàn)了大小為63bp的條帶，并測序驗證了插入的基因序列為BirA識別多肽序列基因。