牛孤雌胚胎凋亡與氧化損傷的研究.pdf

1、卵母細胞的孤雌激活對于一系列與卵母細胞及胚胎相關的技術如胞質(zhì)內(nèi)精子注射、核移植等非常重要，然而孤雌激活受激活方法、胚胎培養(yǎng)液、培養(yǎng)氣相環(huán)境等各種因素的制約，卵裂率、囊胚率均較體外受精(IVF)胚胎差，本文就牛孤雌胚胎凋亡與氧化損傷方面展開研究，旨在提高孤雌激活水平，為克隆技術提供技術基礎。 1．分別用離子霉素(Ion)+6-DMAP與Ion+放線菌酮(CHX)激活牛卵母細胞，用TUNEL法檢測孤雌胚胎凋亡發(fā)生的起始、頻率，以及凋

2、亡細胞的形態(tài)學變化。結果顯示，雖然Ion+6-DMAP(ID)組的卵裂率較Ion+CHX(IX)組低，但囊胚率顯著高于IX組。第5 d首先在IX組檢測到TUNEL陽性核，ID組凋亡比IX晚1 d發(fā)生。ID組的凋亡率從第6 d開始到第8 d由8％增加到11％，而IX組則由13％增加到19％，可見二者增長幅度很相近。IX組平均囊胚細胞數(shù)比ID組顯著減少，但凋亡率卻比ID組高。結果表明牛孤雌胚胎存在凋亡，但采用Ion聯(lián)合6-DMAP激活牛卵母

3、細胞，胚胎發(fā)育情況相對較好一些。 2．在牛卵母細胞成熟液和胚胎培養(yǎng)液中添加β-巰基乙醇(β-ME)，研究β-ME對牛卵母細胞核成熟和孤雌胚胎發(fā)育的影響。牛卵母細胞體外成熟液中分別添加0.05，0.1，0.15mmol/L β-ME，檢查核成熟率；激活的卵母細胞分別培養(yǎng)在含0.05，0.1，0.15 mmol/L β-ME的SOF中，或在1-細胞期、8-16細胞期、桑葚胚期分別添加0.1 mmol/L β-ME，第168～192