山茱萸新苷和人參皂苷肝保護(hù)及抗肝纖維化作用的研究.pdf

1、肝臟受到外界因素刺激，造成急性肝損傷。肝臟損傷后可以通過(guò)臨床藥物治療進(jìn)行一定的修復(fù)、促再生作用，減輕或控制病情進(jìn)展。造成的肝損傷可由肝纖維化進(jìn)展為肝硬化，可以說(shuō)肝纖維化是向肝硬化發(fā)展的必經(jīng)階段，所以及時(shí)治療肝損傷，臨床早期診斷肝纖維化，并及時(shí)加以控制，可以有效阻斷疾病的進(jìn)一步發(fā)展和轉(zhuǎn)歸，具有重要的臨床治療意義。隨著分子生物學(xué)與藥物研究的發(fā)展，急性肝損傷以及抗肝纖維化的研究有許多突破性的進(jìn)展。目前臨床多用 N-乙酰半胱氨酸、拉米夫啶或恩替

2、卡韋治療，臨床療效甚微，尚無(wú)有效的治療方法。阻止肝纖維化的進(jìn)展或促進(jìn)纖維化的逆轉(zhuǎn)是治療肝纖維化的關(guān)鍵。為此，積極尋找有效的治療藥物及藥物作用靶點(diǎn)已成為研究者們的重要課題。本研究對(duì)山茱萸新苷和人參皂苷的肝保護(hù)作用和抗肝纖維化作用進(jìn)行深入探討，旨在探討是否有效阻斷肝細(xì)胞凋亡，抑制炎癥發(fā)展進(jìn)程，是否能緩解肝損傷以及肝纖維化。本研究采用四氯化碳（CCl4）誘導(dǎo)肝損傷作為動(dòng)物研究模型，并用腫瘤壞死因子（TNF-α）刺激肝星狀細(xì)胞（HSC），探討山

3、茱萸新苷肝保護(hù)和人參皂苷 czh-A-69抗肝纖維化作用機(jī)制。
　　（1）四氯化碳（CCl4）誘導(dǎo)肝損傷作為動(dòng)物研究模型，探討山茱萸新苷肝保護(hù)作用。大鼠腹腔注射CCl4誘導(dǎo)肝損傷16 h后血清轉(zhuǎn)氨酶、TNF-α和脂質(zhì)過(guò)氧化物顯著升高，而肝臟抗氧化酶降低。給予山茱萸新苷后各項(xiàng)指標(biāo)得以改善。組織學(xué)研究表明山茱萸新苷抑制CCl4誘導(dǎo)肝損傷。此外CCl4誘導(dǎo)肝損傷后誘發(fā)肝臟一氧化氮（NO）、誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶（iNOS）以及環(huán)氧化酶-2

4、（COX-2）升高，細(xì)胞色素P4502E1(CYP2E1)表達(dá)降低。給予山茱萸新苷后可以顯著抑制肝臟NO形成、降少iNOS和COX-2蛋白表達(dá)，修復(fù)CYP2E1水平。研究結(jié)果表明山茱萸新苷通過(guò)調(diào)節(jié)CYP2E1水平、抑制炎癥應(yīng)答以及減少氧化應(yīng)激作用保護(hù)CCl4誘導(dǎo)的肝損傷。
　?。?）研究人參皂苷czh-A-69對(duì)活化肝星狀細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡作用。肝纖維化以Ⅰ型膠原為主的細(xì)胞外基質(zhì)蛋白（ECM）在肝臟的過(guò)度沉積作為表征。ECM包括Ⅰ型膠

5、原主要來(lái)源于活化的肝星狀細(xì)胞（HSC）。在纖維化進(jìn)程中，HSC由大量?jī)?chǔ)存維生素A的靜息狀態(tài)轉(zhuǎn)化為僅含少量維生素A的纖維形成細(xì)胞，同時(shí)大量表達(dá)α-肌動(dòng)蛋白(α-SMA)和 ECM。蛋白印跡結(jié)果表明人參皂苷 czh-A-69通過(guò)介導(dǎo)MAPK/Akt/TLR4/TAK-1、bcl-2/bax比值和線粒體細(xì)胞色素C水平誘導(dǎo)活化HSC凋亡，從而逆轉(zhuǎn)肝纖維化。人參皂苷代謝物czh-A-69（3.125μM）作用于活化HSC細(xì)胞24 h后或6.25μ

6、M作用1 h可以顯著調(diào)節(jié)caspase-3和PARP表達(dá)；顯著抑制TIMP-1、TLR4及TAK-1磷酸化；調(diào)節(jié)bcl-2/bax比值和線粒體細(xì)胞色素C水平；增加JNK/ERK/p38/MAPK磷酸化；顯著抑制Akt磷酸化。因此，人參皂苷 czh-A-69通過(guò)介導(dǎo) MAPK/Akt/TLR4/TAK-1信號(hào)系統(tǒng)調(diào)節(jié)肝纖維化，數(shù)據(jù)表明人參皂苷 czh-A-69對(duì)肝纖維化的干預(yù)機(jī)制為將人參皂苷 czh-A-69開發(fā)用于臨床肝纖維化治療提供了