核糖核苷酸還原酶M1亞單位基因單核苷酸多態(tài)性與胰腺癌吉西他濱化療敏感性的關系.pdf

1、背景
　　胰腺癌是消化系統(tǒng)常見惡性腫瘤，其發(fā)病隱匿、進展迅速、治療效果及預后極差，居全球癌癥死因第5位。吉西他濱是胰腺癌治療的一線化療藥物，但由于患者的個體間差異及耐藥性，常導致治療效果不佳。
　　核糖核苷酸還原酶M1亞單位（ribonucleotidereductaselargesubunit1，RRM1）是核糖核苷酸還原酶(ribonucleotidereductase，RR)的催化亞基，是吉西他濱的主要作用位點。已有多

2、個實驗證實患者對吉西他濱的反應隨著RRM1表達水平的升高而下降。單核苷酸多態(tài)性（singlenucleotidepolymorphism，SNP）是人類基因組中最豐富的遺傳變異，指基因組DNA序列中頻率大于1％的單個核苷酸的變異?，F(xiàn)已證實RRM1基因SNP可能改變代謝酶活性與產量，導致患者對吉西他濱的不同反應。隨著人類基因組研究(HumanGenomeProject,HGP)的完成和國際人類基因組單體型圖計劃(International

3、HapMapProject，HapMap)的進展，利用SNP預測患者預后的研究已切實可行。
　　第一部分RRM1基因多態(tài)性與胰腺癌根治術后吉西他濱化療患者預后關系的臨床研究
　　方法
　　研究對象包括35例成功隨訪的經病理組織學確診的胰腺癌病例和38例按性別和年齡與病例進行頻數匹配的健康人群對照。探討RRM1基因多態(tài)性改變與胰腺癌預后之間的關聯(lián)。采用功能SNP的選點策略，共選擇了RRM1基因四個多態(tài)性位點(rs1042

4、858A＞G、rs183484G＞T和rs9937A＞G、rs11030918T＞C)，采用高通量技術進行基因型檢測，采用SPSS18.0軟件行Kaplan-Meier方法繪制生存曲線并以Log-rank檢驗生存時間之間的差異。單因素和多因素Cox回歸計算相對危險度(RelativeRatios,RR)。
　　結果
　　rs183484GG基因型患者的中位生存時間明顯長于GT/TT型患者(log-rankp=0.028)。單

5、因素回歸分析結果顯示，與rs183484GG基因型攜帶者相比，GT/TT基因型患者死亡風險顯著提高3.03倍(RR=0.303，95％CI=0.10-0.93，P=0.037)。進一步進行多因素調整后，GG基因型仍具有較好的預后效應(調整RR=0.254，95％CI=0.08-0.83)。以上結果說明rs183484GG基因型是術后吉西他濱化療胰腺癌患者良好預后的獨立預測因素。分層分析表明在男性及淋巴結轉移的患者中，rs183484位點

6、的多態(tài)性改變與胰腺癌患者的預后之間也存在顯著的統(tǒng)計學關聯(lián)(調整RR=0.282，95％CI=0.032-1.04;調整RR=0.317，95％CI=0.14-1.004)。研究還發(fā)現(xiàn)rs9937位點AA基因型患者的生存時間長于AG/GG基因型患者，但差異未達到統(tǒng)計學顯著性水平(log-rankP=0.066，RR=0.543，95％CI=0.17-1.77，P=0.311)。rs183484與rs9937位點的聯(lián)合分析結果表明，死亡風險

7、隨著攜帶預后不良基因型個數的增加而增加，攜帶兩個預后不良基因患者的死亡風險約為未攜帶預后不良基因型的患者的2.29倍(RR=2.288，95％CI=0.942-5.558，P=0.068)。
　　結論
　　RRM1基因多態(tài)性改變與胰腺癌根治術后吉西他濱化療患者的預后有關，rs183484GG基因型是術后吉西他濱化療胰腺癌患者良好預后的預測因素。這可能與該基因影響化療藥物介導的DNA損傷后修復有關。
　　第二部分RRM1

8、基因多態(tài)性在各胰腺癌細胞株中的分析及與其mRNA表達關系的研究
　　方法
　　本研究使用人胰腺癌細胞株Aspc、Bxpc、SU86.86、SW1990、T3M4、Mia、PCT，利用KingFisherDuo磁珠純化系統(tǒng)提取細胞株DNA，PCR擴增目的片段后使用ABI3730XL基因分析儀進行RRM1基因多態(tài)性分析。同時使用KingFisherDuo磁珠純化系統(tǒng)提取細胞株RNA，采用SYBRGreen熒光染料法qRT-PCR