惡性瘧原蟲(chóng)重組蛋白HGXPRT免疫原性及免疫保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的：探討在畢赤酵母中表達(dá)的惡性瘧原蟲(chóng)(HN株)重組蛋白次黃嘌呤—鳥(niǎo)嘌呤—黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(Hypoxanthine-Guanine-Xanthine，HGXPRT)免疫應(yīng)答特性和免疫保護(hù)作用。 材料和方法：對(duì)可能含有目的蛋白的樣品進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡分析(WesternBlotAnalysis)；通過(guò)高效液相層析系統(tǒng)對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行純化；分別以ISA720和FREUND為佐劑，惡性瘧原蟲(chóng)重組蛋白HGXPRT經(jīng)后腿皮下免疫BALB/

2、c小鼠3次，間隔3wk；每次免疫后第十天經(jīng)尾靜脈采血，通過(guò)ELISA檢測(cè)免疫血清中的特異性抗體；以間接免疫熒光實(shí)驗(yàn)(IFA)分析免疫血清對(duì)惡性瘧原蟲(chóng)天然抗原的識(shí)別情況；并于第三次免疫后10天經(jīng)腹腔對(duì)小鼠攻擊感染105約氏瘧原蟲(chóng)致死株；攻擊感染后每隔24小時(shí)觀察小鼠血液中原蟲(chóng)率的動(dòng)態(tài)變化。 結(jié)果：通過(guò)高效液相層析系統(tǒng)對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行純化，表達(dá)產(chǎn)物純度達(dá)到90﹪以上；佐劑加HGXPRT給小鼠免疫后均誘導(dǎo)出針對(duì)抗原HGXPRT體液免疫應(yīng)

3、答，3次免疫后血清中特異性抗體滴度達(dá)到105以上；HGXPRT所誘導(dǎo)的血清能識(shí)別惡性瘧原蟲(chóng)天然抗原；用約氏瘧原蟲(chóng)致死株攻擊感染后第四天各組平均原蟲(chóng)率有顯著差異(F檢驗(yàn)，P＜0.01)，攻擊感染后第三天、第四天、第五天以ISA720為佐劑的實(shí)驗(yàn)組小鼠平均原蟲(chóng)率明顯低于對(duì)照組和空白組的平均原蟲(chóng)率(T檢驗(yàn)，P＜0.01)；以FREUND為佐劑的實(shí)驗(yàn)組小鼠平均原蟲(chóng)率亦明顯低于對(duì)照組(T檢驗(yàn)，P＜0.01)。 結(jié)論：在畢赤酵母菌中表達(dá)的惡