上海地區(qū)豬戊型肝炎分子流行病學調查.pdf

1、戊型肝炎(Hepatitis E，HE)屬于人畜共患病，是由戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus，HEV)引起，該病對人類健康具有很大的危害。HEV在動物宿主中以豬的感染率最高，病毒載量最大，而且從中分離到的病毒和人源毒株也有較高的同源性。因此，摸清豬群中該病的存在狀況，對防控人戊型肝炎的發(fā)生具有重要的公共衛(wèi)生學意義。本試驗采用RT-nPCR的方法，對上海地區(qū)豬群糞便中的戊型肝炎病毒RNA進行了檢測，并通過測序和系統(tǒng)進化分析

2、，探明了上海地區(qū)豬場中戊型肝炎病毒的存在情況，該研究結果為有效防制戊型肝炎發(fā)生提供了科學依據(jù)。 試驗分為兩部分： 1．基因3型豬戊型肝炎病毒的分離鑒定本試驗從上海地區(qū)幾個豬場中隨機采集了46份糞便樣品，制備成10％的糞便稀釋液，提取總RNA，應用特異性兼并引物進行RT-PCR，反轉錄得到的cDNA產(chǎn)物，通過四條兼并引物進行nested-PCR．操作，擴增HEV基因組目的片斷，瓊脂糖凝膠電泳進行檢測，電泳檢測的陽性樣品擴大

3、體系擴增目的片斷，克隆到pMD19-T載體中，轉化大腸桿菌DH5a，然后進行藍白斑篩選，挑選鑒定陽性克隆，進行測序。序列通過CLUSTAL-W(version1.8)、Mega(version 3.1)和Lasergene(version7.0；DNAstar)等生物學軟件進行比對、遺傳距離計算、N-J法進化樹構建，從而確定病毒的進化地位。結果表明，46個樣品中的12份為陽性，測序和進化分析發(fā)現(xiàn)，有兩株戊型肝炎病毒為基因3型，分別命名為

4、CSH-3和CSH-4。為了進一步研究這兩株病毒的特性，對基因組另一個片斷進行了擴增，同樣鑒定為基因3型。這是中國大陸首次發(fā)現(xiàn)基因3型戊型肝炎病毒。 2．上海地區(qū)豬戊型肝炎的分子流行病學調查為了能夠準確的了解上海地區(qū)戊型肝炎在豬群中的流行情況，從上海市10個轄區(qū)的37個豬場中檢測了426份糞便樣品。通過RT-nPCR的方法，擴增HEV ORF2的部分片斷，再通過測序和系統(tǒng)進化分析。結果表明，426份樣品中有111份為HEV陽性，

5、各個區(qū)的陽性率均在0.0％～41.7之間。從每個豬場陽性樣品中隨機挑選1～2個擴大體系擴增，將擴增的片斷克隆T載體，進行測序。系統(tǒng)進化分析表明，其中的10株屬于基因4型，而且和從上海地區(qū)人體內(nèi)分離到的兩株戊肝病毒有很高的同源性。其余的22株屬于基因3型，在進化樹中，形成一個新的分支，但是和一株美國分離到的豬戊型肝炎病毒有較高的同源性。 該研究結果證明基因3型HEV在上海分布已較為廣泛，但在前期國內(nèi)的研究結果顯示，中國境內(nèi)豬群中只