深入研究RIG-G抑制腫瘤細胞增殖的分子機制.pdf

1、RIG-G（retinoic acid-induced gene G）是從急性早幼粒細胞白血?。ˋcute Promyelocytic Leukemia，APL）細胞系NB4中克隆得到的一個可被維甲酸誘導(dǎo)表達的基因。該基因位于10q24，其cDNA全長1919bp，編碼的蛋白分子量約60kD。研究表明，除NB4細胞外，在多種腫瘤細胞（包括白血病細胞和實體瘤細胞）中，RIG-G基因都可以被維甲酸和/或干擾素顯著地誘導(dǎo)表達。有關(guān)RIG-G基

2、因功能的研究表明，RIG-G可以通過上調(diào)細胞內(nèi)p27和p21蛋白的水平來抑制腫瘤細胞增殖。
　　 在以前的工作中，我們曾發(fā)現(xiàn)RIG-G可以與JAB1蛋白發(fā)生相互作用，并將后者阻滯在細胞漿中，無法正常攜帶磷酸化的p27蛋白出核，從而抑制了p27蛋白通過胞漿的泛素/蛋白酶體系統(tǒng)降解。近年來的研究顯示，JAB1是COP9信號體（COP9 signalosome，CSN）復(fù)合物的一個亞基，也被稱為CSN5。CSN是一個多亞基復(fù)合物，在哺

3、乳動物細胞中由9個亞基組成，主要存在于細胞核中。CSN復(fù)合物具有多種功能，可在胚胎發(fā)育、細胞周期調(diào)控、血管生成以及維持微環(huán)境穩(wěn)態(tài)等多種生命活動中發(fā)揮重要作用。據(jù)文獻報道，CSN復(fù)合物可以調(diào)控一類含cullin和RING蛋白的E3泛素連接酶復(fù)合物（cullin-RING-ligases，CRLs）的活性和穩(wěn)定性，并繼而影響細胞內(nèi)蛋白質(zhì)的泛素化。在CRLs-E3連接酶所識別的靶蛋白中包含一些與細胞周期密切相關(guān)的調(diào)控因子如p27、p21、cy

4、clinD等，這些蛋白的泛素化對于保證細胞周期的正常進行至關(guān)重要。細胞中的CSN復(fù)合物一旦發(fā)生異常即會引起細胞周期紊亂，最終導(dǎo)致疾病包括腫瘤的發(fā)生。由于RIG-G可以影響JAB1/CSN5在細胞內(nèi)的分布和功能，那么，RIG-G是否也會影響CSN復(fù)合物的功能呢？本課題通過研究RIG-G對CSN復(fù)合物組成以及功能的影響，對RIG-G如何調(diào)控p27和p21蛋白、抑制細胞增殖的分子機制進行了深入的探討。
　　 我們以可誘導(dǎo)表達RIG-G

5、的穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株U937T-RIG-G及其對照細胞U937T-pTRE為研究對象，通過非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳、凝膠過濾層析等實驗，發(fā)現(xiàn)RIG-G可以改變 CSN復(fù)合物的組成。進一步利用Western blot、RT-PCR、蛋白降解抑制和合成抑制等試驗，我們又發(fā)現(xiàn) RIG-G可以使CRL-E3連接酶中的亞基cullin1以及Skp2的蛋白水平下降，表明RIG-G的確可以通過改變CSN復(fù)合物的組成影響其功能。CRL-E3連接酶的穩(wěn)定性下降，

6、會直接使p27蛋白在細胞核內(nèi)的泛素化受到抑制，導(dǎo)致其無法降解而在細胞內(nèi)累積。
　　 此外，我們發(fā)現(xiàn) RIG-G還可以抑制c-Jun蛋白的磷酸化。C-Jun蛋白磷酸化水平的降低會抑制 c-myc基因的轉(zhuǎn)錄，進而促進p21基因的表達。RIG-G的這種抑制作用很可能也是因為CSN復(fù)合物水平的下降引起的。
　　 總之，本課題在原有工作基礎(chǔ)上深入研究了RIG-G對CSN復(fù)合物組成和功能的影響，進一步闡明了RIG-G上調(diào)p27和p2