大鼠移植肺的蛋白質組學研究.pdf

1、研究背景：肺移植已成為治療終末期肺部疾病的有效方法。隨著肺保存質量的提高、外科技術和麻醉方法的改進、高效抗生素的應用以及免疫抑制劑的發(fā)展等，肺移植獲得了較大的進展，肺移植患者的生活質量得到了明顯改善。但是，供體的缺乏，移植后排斥反應、閉塞性細支氣管炎仍然是影響肺移植數(shù)量及移植后患者長期生存的主要問題。尤其是肺移植術后免疫排斥反應始終是影響著肺移植患者長期存活的關鍵。肺移植術后免疫排斥反應確切的發(fā)病機制尚不完全清楚。1995年3月國際心肺

2、移植協(xié)會在匹茲堡醫(yī)學中心召開了第二次工作會議，指出急性排斥反應的主要病理診斷依據(jù)是支氣管、血管周圍及間質的單核細胞浸潤，但在急性肺排斥的分級中應述及并存的氣道炎癥及其分級。慢性排斥反應分兩種：①阻塞性細支氣管炎；②血管性粥樣硬化癥。目前認為慢性排斥反應是以免疫因素為主的多因素參與的細支氣管增殖型病變，表現(xiàn)為局部持續(xù)的炎癥反應，細支氣管上皮損傷，內膜增生，纖維結締組織增殖，導致管腔閉塞，肺組織實變。肺移植術后的免疫抑制治療一直是人們關注的

3、焦點，但臨床上并沒有統(tǒng)一的免疫抑制方案?；蛑委熓怯锌赡芙鉀Q排斥反應的方法之一，但實現(xiàn)這一目標還有很長遠的距離。 蛋白質組學是以蛋白質組為研究對象，從整體的角度，分析細胞內動態(tài)變化的蛋白質組成與活動規(guī)律。其研究主要涉及兩方面的 內容：一是研究蛋白質組的組成，即表達蛋白質組學；二是研究蛋白質組的功能，即功能蛋白質組學。蛋白質組學技術主要由雙向凝膠電泳技術、蛋白質鑒定技術和生物信息學技術組成。應用蛋白質組學技術，可獲得在不同

4、生理或病理階段細胞、組織或器官內表達的全部蛋白質信息，并可作為各種疾病基礎研究的技術平臺。近期國內外已成功地將蛋白質組學技術引入肺疾病研究領域，主要包括：(1)正常肺組織蛋白質組研究；(2)肺支氣管病變的蛋白質組研究。故若能直接從蛋白質入手來研究肺移植后排斥反應將更全面、客觀地揭示肺移植術后免疫排斥反應的發(fā)病機制，為肺移植術后免疫排斥反應的診斷和防治開辟新的思路、提供新的線索。 目的：建立異體大鼠左肺移植模型，觀察、分析

5、移植肺形態(tài)學改變；應用蛋白質組學技術測定在肺移植后不同時段移植肺組織的蛋白質組變化，找出不同時間段蛋白質組變化的信息數(shù)據(jù)，分析移植肺動態(tài)變化的差異蛋白質，確定肺移植后免疫排斥反應發(fā)生相關的特異蛋白質，更深入地闡明肺移植后免疫排斥反應發(fā)生、發(fā)展的可能機制。 方法： (1)建立大鼠左肺原位異體移植模型 以Wister大鼠為供體，SD大鼠為受體，行大鼠左肺原位異體移植。分為3組：正常Wister大鼠作為對照組；移植后急性排斥

6、反應組(術后1周)；移植后慢性排斥反應組(術后6周)。肺移植組常規(guī)給予免疫抑制劑治療，分組喂養(yǎng)后按照規(guī)定時間收獲移植肺標本，正常對照組為未經任何處理的Wister大鼠肺臟，計算肺濕／干比值，肺標本石蠟包埋，切片，HE、VG染色，行肺組織形態(tài)學觀察。 (2)在第一步的基礎上，進行移植后肺組織的蛋白質組學分析，對移植后兩組16只大鼠肺組織(急慢性排斥組各8只)和配對的正常肺組織進行比較蛋白質組學研究，即利用固相pH梯度(IPG)雙向

7、凝膠電泳(2-DE)分離大鼠移植后肺組織和正常肺組織的總蛋白質，考馬斯亮藍染色后經圖像分析識別差異表達的蛋白質，應用基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜(MAI-DI-TOF-MS)鑒定差異表達的蛋白質點。分析差異表達蛋白質的功能及與肺移植后免疫排斥相關疾病的關系。 結論： (1)采用比較蛋白質組學方法成功鑒定13個與肺移植后疾病相關的蛋白質。 (2)大鼠肺移植后肺組織發(fā)生能量代謝變化，糖酵解增強，應激反應降低，自我