食管癌細(xì)胞體外培養(yǎng)藥敏試驗和海綿總萜烯對食管癌抗癌作用的研究.pdf

1、目的： 本試驗應(yīng)用四甲基偶氮唑鹽染色法（tetrazolium dye,MTT）研究不同食管癌患者對常用化療藥物及化療方案的藥物敏感性，P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-pg）及肺耐藥相關(guān)蛋白（Lung resistant-related protein, LRP）的表達(dá)及其與食管癌臨床病期、組織分化程度、藥敏試驗結(jié)果的相關(guān)性，探討不同食管癌患者對藥物的敏感性，為食管癌的臨床化療提供個體化用藥的實驗室依據(jù)。研究海綿總萜烯（

2、AGH）單獨用藥和聯(lián)合用藥對食管癌細(xì)胞的敏感性和其對食管癌細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期的影響。 方法： 選取手術(shù)切除的新鮮食管癌組織標(biāo)本，進(jìn)行體外原代細(xì)胞培養(yǎng)，選用海綿總萜烯與食管癌化療常用的藥物及化療方案進(jìn)行腫瘤細(xì)胞藥物敏感試驗，同時應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測食管癌細(xì)胞P-糖蛋白及肺耐藥相關(guān)蛋白的表達(dá)情況，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測海綿總萜烯作用后食管癌細(xì)胞的凋亡及細(xì)胞周期的變化。 結(jié)果： 共取手術(shù)標(biāo)本76例，培養(yǎng)成功58例，失敗18

3、例，成功率76.3％（58／70）。單一用藥組間敏感率不同（P＜0.05），各單藥間經(jīng)兩兩比較證實海綿總萜烯和紫杉醇抑制率無顯著差別（P＞0．05），其他三種化療藥與海綿總萜烯相比差別有顯著性（P＜0.05）。單藥對食管癌細(xì)胞的敏感性與腫瘤臨床病期無明顯相關(guān)性（P＞0.05），與組織分化程度有關(guān)（P＜0.05），隨食管癌組織分化程度的減低，單藥敏感性升高。聯(lián)合用藥對58例食管癌細(xì)胞的抑制率均大于單用藥，海綿總萜烯和其他化療藥聯(lián)合應(yīng)用的抑

4、制率以海綿總萜烯聯(lián)合順鉑和海綿總萜烯聯(lián)合紫杉醇效果好，而臨床常用的化療方案中以紫杉醇聯(lián)合順鉑效果最好，其次為順鉑聯(lián)合長春瑞濱、順鉑聯(lián)合5-氟脲嘧啶。 食管癌為P-gp高表達(dá)腫瘤，陽性率為69％（40／58），且多為“＋＋～＋＋＋”，陽性染色多位于胞漿或胞膜，LRP在食管癌中表達(dá)率也較高，總陽性率為58.6％（34／58）。P-gp、LRP表達(dá)程度與食管癌臨床病期、組織分化程度無明顯相關(guān)性（P＜0.05）。研究各用藥組的藥物敏感性

5、和免疫組化染色結(jié)果顯示海綿總萜烯的敏感性與P-gp、LRP表達(dá)程度均無明顯相關(guān)（P＞0.05），順鉑的敏感性與P-gp表達(dá)程度無關(guān)（P＞0.05），與LRP表達(dá)的強(qiáng)弱有關(guān)（P＜0.05），長春瑞濱、紫杉醇的敏感性均與P-gp和LRP表達(dá)的程度有關(guān)（P＜0.05），5-氟脲嘧啶與P-gp、LRP的表達(dá)程度無關(guān)（P＞0.05）。 海綿總萜烯對食管癌細(xì)胞有明顯的抑制作用，可引起細(xì)胞凋亡，海綿總萜烯作用食管癌細(xì)胞12小時開始出現(xiàn)凋亡，作

6、用48小時出現(xiàn)最大凋亡峰，48小時內(nèi)細(xì)胞凋亡指數(shù)隨藥物作用時間的延長而增加，呈現(xiàn)一定的時間效應(yīng)關(guān)系。海綿總萜烯對食管癌細(xì)胞周期的影響不明顯（P＞0.05）。 結(jié)論： 1．人食管癌細(xì)胞原代培養(yǎng)MTT藥敏試驗成功的關(guān)鍵是取材，取材時應(yīng)在邊緣部位多點取材，盡量剔除非腫瘤組織，避免污染。 2．幾種常用化療藥物體外藥敏試驗的敏感順序為紫杉醇、長春瑞濱、順鉑、5-氟脲嘧啶，聯(lián)合用藥敏感性順序為順鉑聯(lián)合紫杉醇、順鉑聯(lián)合長春瑞濱、順鉑聯(lián)