組織蛋白酶D在鼻咽癌細胞中相互作用蛋白的篩選與鑒定.pdf

1、目的：
　　篩選并鑒定鼻咽癌細胞中組織蛋白酶D(Cathepsin D, CTSD)的相互作用蛋白，初步了解CTSD在鼻咽癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用及機制。
　　方法：
　　收集高轉(zhuǎn)移鼻咽癌5-8F細胞的總蛋白，采用免疫共沉淀結(jié)合凝膠電泳分離CTSD相互作用蛋白，應用電噴霧四級桿飛行時間串聯(lián)質(zhì)譜鑒定相互作用蛋白，結(jié)合基因本體論、功能聚類、信號通路、蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡分析等生物信息學方法綜合分析CTSD相互作用蛋白，采用免疫共沉

2、淀結(jié)合Western blot方法對CTSD相互作用蛋白EGFR、HSP90A進行驗證。
　　結(jié)果：
　　1、采用免疫共沉淀結(jié)合質(zhì)譜方法篩選并鑒定了143個CTSD相互作用蛋白。
　　2、將143個CTSD相互作用蛋白進行功能聚類分析顯示：其中70個CTSD相互作用蛋白根據(jù)功能聚為12類，主要涉及到以下幾個方面：跨膜運輸、細胞骨架、氧化磷酸化、蛋白質(zhì)合成、細胞凋亡、信號轉(zhuǎn)到、氧化還原酶活性、分子伴侶、糖代謝等。另外73

3、個CTSD相互作用蛋白未參與聚類。
　　3、將143個CTSD相互作用蛋白進行 GO分析，結(jié)果如下：GO_BP分析顯示CTSD相互作用蛋白生物學過程主要涉及到應激反應、負調(diào)控、代謝過程、運輸過程、蛋白定位及轉(zhuǎn)運過程；GO_MF分析顯示CTSD相互作用蛋白分子功能主要涉及到蛋白結(jié)合、催化活性、嘌呤核苷酸綁定、核苷酸結(jié)合、細胞骨架、氧化還原酶活性、結(jié)構(gòu)分子活性等；GO_CC分析顯示CTSD相互作用蛋白亞細胞定位于膜、細胞器、囊泡、高分

4、子復合物中等。
　　4、KEGG和Biocarta信號通路分析顯示：143個CTSD相互作用蛋白涉及2條Biocarta信號通路包括低氧誘導因子相關信號通路，端粒、端粒酶、細胞老化；9條KEGG信號通路：氧化磷酸化、丙酮酸代謝、糖酵解信號通路、粘附連接、抗原處理和遞呈、丙酸代謝、核糖體信號通路、磷酸戊糖信號通路。
　　5、蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡分析顯示：EGFR、HSP90A蛋白與CTSD形成相互作用組。
　　6、應用免疫

5、共沉淀結(jié)合Western blot顯示EGFR、HSP90A與CTSD結(jié)合，驗證了質(zhì)譜結(jié)果的可靠性。
　　結(jié)論：
　　1、本研究采用免疫共沉淀結(jié)合質(zhì)譜分析在鼻咽癌細胞中鑒定了143個CTSD的相互作用蛋白，為進一步研究CTSD蛋白的功能提供了實驗依據(jù)。
　　2、生物信息學綜合分析發(fā)現(xiàn)，EGFR、HSP90A蛋白與CTSD在鼻咽癌細胞中形成相互作用組，可能在鼻咽癌侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。
　　3、應用免疫共沉淀結(jié)合